Skp2在人晶状体上皮细胞中的表达及与p27<'kip1>的相关性研究

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目的白内障是全球第一位致盲眼病,在全球4000万-5000万盲人中,因白内障致盲者约占46%。当前治疗白内障的主要手段是手术摘除混浊的晶状体,但术后晶状体后囊混浊即后发性白内障(以下简称后发障)的发生,会使术后提高的视力再度下降,影响手术效果。后发障在成人术后发生率为30-50%,在儿童则为100%。因此,后发障的防治一直受到人们的关注。目前组织病理学已证实残留的前囊膜或赤道部晶状体上皮细胞增生、向后囊移行并化生是后发障发生的主要原因,所以预防后发障的发生就要控制残留晶体上皮细胞的增殖。晶状体上皮细胞增殖同样依循细胞周期进行。泛素蛋白酶体途径是真核细胞内重要的蛋白质质控系统,参与调节细胞周期进程、细胞增生与分化,以及信号传导等多种细胞生理过程。Skp2是细胞从G1期进入S期的必需因子,是DNA复制所必需的人类F-box蛋白家族成员,主要通过泛素蛋白酶体降解途径,对多种靶蛋白泛素化降解从而与细胞周期调控细胞增殖密切相关。目前国内外未见Skp2在晶状体上皮细胞的表达及对细胞增殖影响的报道,也未发现在细胞增殖过程中Skp2与p27kip1关系的报道。对晶状体上皮细胞中Skp2表达及增殖过程中Skp2与p27kip1关系的研究为从细胞周期调控角度阻止晶状体上皮细胞的增殖,防止后发性白内障发生的进一步研究有着重要的价值。方法1细胞爬片分别将人晶状体上皮细胞按每孔1×106细胞数接种于6孔板内,将盖玻片铺于孔底,使细胞在玻片上贴壁生长。将含有不同浓度(1μ·l-1、10μg·l-1、100μg·l-1)bFGF的10%胎牛血清1640培养液以每孔2.5ml加入,对照组加入含等体积PBS的10%胎牛血清1640培养液2.5ml。37℃,5%CO2、饱和湿度的恒温孵箱中培养48h。2免疫细胞化学将制成的爬片小心取出,PBS清洗,冰丙酮(4℃)固定。采用免疫细胞化学的方法检测Skp2在晶状体上皮细胞的表达。3图像采集应用HPIAS1000高清晰度彩色病理分析系统,将染色的细胞爬片在镜下统一放大400倍,每张爬片随机选取不相重叠的10个视野,用鼠标描绘所测细胞阳性区域,计算机自动进行测量,获得每张爬片的积分光密度值(Integrated ODAverage)。4统计学分析统计学分析采用单因素方差分析以及Spearman等级相关分析,所有资料均在SPSS 10.0软件下操作,检验水准α=0.05。结果1免疫细胞化学SABC法检测人晶状体上皮细胞上Skp2的表达细胞爬片的人晶状体上皮细胞上均可检测Skp2,p27kip1,PCNA蛋白的存在。Skp2和PCNA为细胞核棕黄色着色,p27kip1于细胞核及细胞浆上均可见棕黄色颗粒沉积。2图像分析结果通过测出积分光密度值I.O.D比较发现除1μg/l组Skp2的P值为0.089外,其余各组加入不同浓度bFGF培养的Skp2,p27kip1,PCNA的蛋白表达与它们空白对照组均有显著性差异。3相关性分析结果晶状体上皮细胞增殖过程中Skp2的蛋白表达程度与PCNA的蛋白表达有明显正相关性,(r=0.706,P<0.05),p27kip1的蛋白表达程度与PCNA的蛋白表达有明显负相关性,(r=-0.668,P<0.05),p27kip1和Skp2之间呈显著的负相关关系(r=-0.679,P<0.05)。结论1.人晶状体上皮细胞中可见Skp2的表达。2.Skp2随bFGF浓度的增加表达增强。3.在增殖过程中Skp2的表达与PCNA呈正相关,与p27kip1呈负相关。
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