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[目 的]通过体外培养原代兔CSCs,以APCM为支架材料构建组织工程角膜基质,探讨植入CSCs后的APCM在兔角膜深板层移植中的生长情况,为后期组织角膜工程的研究提供实验基础。[方 法](1)体外分离培养原代兔CSCs并鉴定;(2)用经慢病毒(LV Lentivirus)转染的EFGP标记兔CSCs,通过倒置荧光显微镜、流式细胞仪确定最佳感染时间及M0I值;(3)以APCM为支架材料,行兔角膜深板层移植,取新西兰大白兔24只,分为3组。实验组:APCM+兔CSCs;对照组A:APCM组;对照组B:兔角膜原位缝合组;(4)各组术后1-4周、8周眼前段照相及荧光素染色;(5)术后1周、1个月、2个月前段OCT测角膜厚度;(6)术后2个月各组取材做冰冻切片免疫荧光及HE染色、GFP免疫组化检测。[结 果](1)成功分离培养出兔角膜基质细胞;(2)经LV-EGFP转染的兔CSCs倒置荧光显微镜下观察,吸出病毒液24h后即可观察到绿色荧光,随着时间的延长荧光强度逐渐增强,72h为最佳转染时间;流式细胞仪检测在MOI=400时,LV-EGFP对兔CSCs的存活率无影响;(3)动物实验造模后8周中,实验组角膜8点方位新生血管长入角膜约2mm,角膜透明,未见明显瘢痕,荧光素染色示植片中央区域有着色;对照组A角膜2点方位新生血管长入角膜约3mm,植片中央区域荧光素着色;对照组B角膜7点方位新生血管长入角膜约1mm,角膜透明,荧光素染色示角膜点状着色;(4)眼前段OCT实验组角膜基质信号较均匀,植片与植床紧密融合生长;对照组A角膜基质层信号欠均匀,可见移植的APCM与原基质间有明显的界限,融合欠佳;对照组B基质层灰度均匀,可见清晰的的上皮层,基质层和内皮层;(5)术后测各组中央角膜厚度分别为:323μm、166μm、324μm;(6)冰冻切片免疫荧光检测实验组可见绿色荧光,对照组A/B均未见荧光;免疫组化实验组可见GFP表达阳性,对照组A/B均为阴性。[结 论]注射有兔CSCs的APCM,可作为支架材料,体外构建兔组织工程角膜,植片与原角膜植床融合生长良好,结构、功能更接近于兔自体角膜,可为临床研究角膜移植提供良好的原料。