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本文以生长发育正常、健康状况良好的6周龄雌性昆明小鼠为实验动物,采用脂肪细胞离体培养技术分离培养小鼠前体脂肪细胞,以不同浓度的烟酰胺(Nicotinamide,NAM)处理细胞,分析了NAM对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及能量代谢的影响,并比较了不同浓度NAM对前脂肪细胞分化过程中沉默信息调节因子1(Sirtuintype1,Sirt1)及过氧化物酶增殖物活化受体γ(Peroxisomeproliferator-activatedreceptor-gamma,PPARγ)基因mRNA表达的调控,为进一步阐明NAM在前体脂肪细胞增殖分化及能量代谢中的作用机理提供理论依据。
通过细胞形态观察、噻唑蓝比色法(Methylthiazolyltetrazolium,MTT)检测了不同浓度NAM对小鼠前体脂肪细胞增殖活力的影响。结果表明,NAM能促进小鼠前体脂肪细胞的增殖活力,200μmol/L的NAM促增殖作用较100,300,400,500μmol/L四种浓度显著(P<0.01);100、300,400μmol/L的NAM,诱导增殖效果较低(P>0.05);而500μmol/L则部分抑制细胞增殖(P>0.05)。
通过细胞形态观察、油红O染色等方法分析不同浓度NAM对小鼠前体脂肪细胞分化的影响。结果表明:低浓度NAM(100~400μmol/L)可促进细胞内脂肪生成量,促进前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化,200μmol/LNAM作用效果显著(P<0.01),而高浓度NAM(500μmol/L)则对细胞的分化起抑制作用(P>0.05)。
利用Griss法,ATPase检测试剂盒,罗丹明-123荧光染色法等检测200μmo/L,500μmol/L两种浓度的NAM对分化24h的前体脂肪细胞中一氧化氮(Nitricoxide,NO)生成量、三磷酸腺苷酶(Adenosinetriphosphatase,ATPase)活性及线粒体数目的影响。结果显示:低浓度NAM(200μmo/L)可使NO生成量减少,提高ATPase的活性,增加线粒体的数目(P<0.01);而高浓度NAM(500μmol/L)能促进NO的生成,抑制ATPase的活性,使线粒体的数目减少(P>0.05)。
利用实时荧光定量PCR支术(Real-timefluorescentquantitativePCR,FQ-PCR),检测200μmo/L,500μmol/L两种浓度的NAM对分化24h的前体脂肪细胞Sirt1和PPARγmRNA表达的影响。结果表明:低浓度NAM(200μmo/L),可抑制Sirt1mRNA的表达,上调PPARγmRNA的表达;而高浓度NAM(500μmol/L)则相反。