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目的:检测白血病患者接受非血缘脐血造血干细胞移植(umbilical cord bloodtransplantation,UCBT)后早期T淋巴细胞亚群的重建,同时建立T细胞受体重排删除DNA环(T cell receptor rearrangement excision circles,TRECs)的检测方法并观察其在UCBT后早期变化,探讨UCBT后早期T细胞免疫重建的规律及其重建的潜能。方法选择27例白血病患者,其中21例接受UCBT、6例接受同胞外周血/骨髓干细胞移植(Peripheral Blood Stem Cell/Bone Marrow Transplantation,sPB/BMT),使用八色流式细胞术跟踪监测移植后患者植入时、1月、2月、3月、4月、6月T淋巴细胞亚群的变化,另选择年龄相当的5例正常人做对照。建立实时定量PCR(real~-time PCR)技术检测单个核细胞中TRECs的实验方法,检测移植后早期患者TRECs的变化。通过移植患者临床随访探讨并发症出现与淋巴细胞亚群重建的相关性。为了进一步明确非血缘脐血移植后发挥移植物抗肿瘤作用的主要细胞,对比不同移植物中淋巴细胞亚群。结果21例白血病患者接受UCBT后CD4~+T细胞重建情况:CD4~+T细胞自植入时比例(占外周血淋巴细胞)即明显减低,移植后2月降至最低(15.24±11.43)%,后逐渐恢复,但移植后6月仍未恢复正常;CD8~+T亚群移植后恢复较快,植入时其比例已接近正常值,CD4/CD8比值至移植后6月仍低于正常。移植后各亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞在外周血中的绝对值,在植入时、移植后1月和移植后2月sPB/BMT组均高于UCBT组,移植后1月二者分别为(0.169±0.067)vs(1.068±0.474)、(0.092±0.063)vs(0.199±0.083)、(0.076±0.017)vs(0.882±0.417)(p<0.05);UCBT组CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞绝对值自移植后2月开始恢复,移植后6月重建明显高于sPB/BMT组,分别为(2.56±0.39)vs(1.66±0.36)、(0.83±0.19)vs(0.55±0.29)、(1.45±0.24)vs(0.92±0.15),但统计学无差异。27例白血病患者移植后早期T细胞亚群重建情况:两组移植患者均显示记忆T细胞亚群(CD45RA~-CD62L~+、CD45RA~-CD62L~-、CD45RA~+CD62L~-)较初始(na ve)T细胞亚群(CD45RA~+CD62L~+)恢复快。UCBT后早期出现na ve T细胞升高,移植后2月降至最低,后再缓慢上升。移植后6月尚未达到正常水平。且UCBT组中观察到一群CD4~+终末分化效应记忆T细胞(terminally differentiatedeffector memory,TTD,CD45RA~+CD62L~-),其恢复的数值显著高于移植后各时间段sPB/BMT组患者及正常对照组(P<0.05)。移植后2、3月CD4~+及CD8~+记忆T细胞亚群TCM(CD45RA~-CD62L~+)、TEM(CD45RA~-CD62L~-)统计值有显著性差异(P<0.05)两组移植后患者TRECs检测情况:移植早期患者胸腺输出功能低下,移植后1月均检测不到TRECs,移植后3月仅1例UCBT患者及2例sPB/BMT患者可检测到,且含量均明显低于正常人。结论1.移植后早期T细胞重建较慢,CD8~+T细胞亚群重建快于CD3~+及CD4~+T细胞亚群;2.移植后记忆T细胞重建较快,初始T细胞移植后早期减低,UCBT中发现CD4~+终末效应T细胞恢复较快,明显高于sPB/BMT组;3.移植后早期胸腺输出功能缺失,移植后3月极少患者能检测到TRECs。