SARS CoV动物溯源及其结构蛋白免疫学特性的研究

来源 :中国科学院研究生院(武汉病毒研究所) | 被引量 : 2次 | 上传用户:clarain
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本论文主要对SARS CoV的动物溯源及其结构蛋白的免疫学特性进行了初步探讨,调查了类SARS CoV在家养果子狸及野生哺乳动物中的流行,揭示了类病毒颗粒与人树突细胞的相互作用,以及杆状病毒表达的N/S蛋白免疫小鼠后引发的免疫反应,为研究SARS CoV的起源、进化及其和宿主细胞作用的机制,以及SARS CoV疫苗开发提供一定的科学依据。第一章以综述的形式描述了SARS的爆发流行,其致病因子SARS CoV的一些生物学性状及其疫苗的研究进展。另外对杆状病毒在哺乳动物细胞内高效表达外源基因也进行了初步的阐述。在第二章里,我们用RT-PCR和ELISA检测不同地区的家养果子狸结果表明五峰和宜昌地区比其它地区呈现较高的SARS CoV特异性的抗原及抗体阳性。同时,我们还选取了湖北五峰后河自然保护景区作为研究地点,采集了鼬獾(Melogale moschata),猪獾(Actonyx collaris),狗獾(Meles meles),白腹巨鼠(Leopoldamys edwardsi)及野生果子狸(Paguma larvata)样品,血清检测结果显示白腹巨鼠中的抗体阳性率最高(33.33%),野生果子狸、鼬獾和猪獾分别为5.41%、16.67%和14.29%。这种对蝙蝠之外的一些野生哺乳动物可能携带的类SARS样冠状病毒进行的初步调查,为追溯SARS CoV的来源以及研究其跨物种传播机制与流行规律提供了一定的科学依据。在第三章里,我们利用杆状病毒表达载体构建两种重组的AcMNPV,分别表达蝙蝠来源的S蛋白vAcRps和人SARS CoV的E,M蛋白vAcME,共感染sf细胞后有类病毒颗粒的形成,证明了不同来源SARS CoV的膜蛋白S,M,E可以在细胞内自发组装成类病毒颗粒。此类病毒颗粒可以与树突细胞(DCs)相互作用,促使IL-6,IL-10和TNF-α分泌以及表面分子标记CD40,CD80,CD86和CD83上调表达。将此类病毒颗粒和人源SARS CoV类病毒颗粒(整合了人源SARS CoV的S,E,M蛋白)分别与DC相互作用发现前者可以诱发更强的免疫反应,尤其是IL-6和TNF-α的分泌大幅度提高。在体外不能有效地增殖蝙蝠来源的SARS-like CoV(SL-CoV)的情况下,整合了蝙蝠S蛋白的类病毒颗粒和人树突细胞的作用可以做为一种模型来研究SL-CoV和宿主细胞的相互作用。在第四章,我们利用插入哺乳类细胞活性启动子元件的杆状病毒分别表达蝙蝠来源的SL-CoV的N和S蛋白,采用直接注射重组病毒的方法免疫小鼠后都可以产生体液免疫和细胞免疫反应,其中IFN-γ的检测水平远高于IL-4,表明免疫小鼠以Th1型细胞免疫为主。另外特异性的抗SARS CoV的IgG抗体也有较高水平的产生。因此,含有哺乳动物启动子元件的重组杆状病毒可以有效地在哺乳动物体内表达外源蛋白,且对宿主本身安全,从而可以作为一种潜在的活病毒载体疫苗。
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