【摘 要】
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目的:随着测序和实验技术的发展,大量的环状RNA(circular RNA,circRNA)已被发现,并进一步被验证在癌症中发挥重要作用。在本文中,我们在胃癌(gastriccancer,GC)中探究了 circRNAhsacirc0005284的重要作用,并进一步验证其潜在的分子机制,探究其作为分子标志物的可能性。方法:首先,采用基因芯片技术分析circRNA在胃癌组织中的表达情况找到具有表达差
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目的:随着测序和实验技术的发展,大量的环状RNA(circular RNA,circRNA)已被发现,并进一步被验证在癌症中发挥重要作用。在本文中,我们在胃癌(gastriccancer,GC)中探究了 circRNAhsacirc0005284的重要作用,并进一步验证其潜在的分子机制,探究其作为分子标志物的可能性。方法:首先,采用基因芯片技术分析circRNA在胃癌组织中的表达情况找到具有表达差异的该指标。其次,进行qRT-PCR检测,明确hsacirc005284在GC组织及其配对的相邻非肿瘤组织中的表达水平。随后,根据qRT-PCR检测结果探讨hsacirc0005284的表达与临床病理特征之间的关系,探究其作为分子标志物的可能性。然后,通过慢病毒系统及嘌呤霉素筛选构建hsacirc005284过表达细胞系,进行后续功能试验。具体为,通过CCK-8、集落形成实验探究hsacirc0005284对GC细胞增殖的影响;通过划痕试验探究hsacirc0005284对GC细胞迁移的影响;通过Transwell试验探究hsacirc0005284对GC细胞侵袭的影响。最后,通过蛋白质免疫印迹实验(Western Blot)验证hsacirc0005284潜在的分子调控机制。结果:基因芯片及qRT-PCR结果显示,与邻近正常组织相比,hsacirc0005284在GC组织中的表达水平较高。此外,我们发现hsacirc0005284的表达水平与性别相关,而与患者年龄、肿瘤大小、TNM分期、血管浸润、神经浸润和美国癌症联合委员会(AJCC)分期无关。CCK-8、集落形成、划痕愈合试验和Transwell试验表明,过表达的hsacirc0005284促进GC细胞的增殖、迁移和侵袭。Western Blot实验表明,过表达的hsacirc0005284上调了 EMT相关蛋白N-cadherin和Vimentin的表达,下调了 E-cadherin的表达。结论:环状RNAhsacirc0005284在胃癌患者组织中高表达。从功能上来说,过表达的hsacirc0005284具有促癌作用,促进了 GC细胞的增殖、迁移和侵袭。从机制上来说,过表达的hsacirc0005284通过影响GC细胞EMT相关蛋白的表达水平发挥功能,表明其促癌作用可能与EMT进程相关。
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