β-羟丁酸对牛子宫内膜细胞合成和分泌前列腺素E2的影响

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:JAVA_Star
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背景:奶牛酮病是围产期奶牛多发的一种代谢性疾病。β-羟丁酸(β-hydroxybutyric acid,BHBA)是酮体的主要成分,高水平BHBA可诱导奶牛发生氧化应激及炎性反应,导致泌乳量下降,产后疾病多发,严重影响奶牛繁殖性能。而前列腺素是一类有生理活性的不饱和脂肪酸,广泛分布于身体各组织和体液中,并且与炎症反应、繁殖等体内多种生命活动有着密切关系。目的:本研究旨在通过体外培养牛子宫内膜细胞(Bovine endometrial cells,BEND),检测BHBA处理BEND细胞后前列腺素E2以及调控前列腺素E2合成的相关基因表达水平变化,阐明BHBA对BEND细胞前列腺素E2的合成和分泌的影响,为进一步深入研究酮病对奶牛产后生产、繁殖性能等的影响及其机制提供理论依据。方法:通过向体外培养的牛子宫内膜细胞培养液中分别添加0、0.6、1.2、2.4 mmol/L4种不同浓度的BHBA,于6 h,12 h,24 h后分别提取细胞培养上清液、总RNA和总蛋白,采用ELISA方法检测前列腺素E2的含量,以及采用荧光定量PCR及Westernblot方法检测BEND细胞cPLA2、COX-2、cPGEs等前列腺合成途径相关基因的表达水平变化。结果:ELISA结果显示,不同浓度BHBA作用BEND细胞12 h和24 h后可显著降低BEND细胞培养上清液中PGE2的含量,而6 h则影响不显著;荧光定量PCR结果显示,不同浓度BHBA处理BEND细胞6 h后,cPLA2、COX-2、cPGEs mRNA表达均未发生显著改变,但作用12 h和24 h后BHBA可显著促进cPLA2 mRNA表达,抑制COX-2、cPGEs mRNA表达,呈时间与剂量依赖性;WB结果显示,不同浓度BHBA处理BEND细胞12 h后,显著促进cPLA2蛋白表达,抑制COX-2、cPGEs蛋白表达。结论:BHBA可显著降低BEND细胞上清液中PGE2含量,这可能是通过调节BEND细胞中cPLA2、COX-2、cPGEs等PGE2合成途径关键基因表达水平的变化来实现的,且这种调节作用在BHBA直接作用于细胞12小时后即可发生。
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