沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ对胃部细胞黏附的影响

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huanghui0123
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目的:探讨沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(GMⅡ)对人胃癌细胞株BGC-823黏附活性的影响及其可能相关机制。  方法:通过脂质体Lipofectamine2000将GMⅡ-shRNA真核表达质粒载体转染至人胃癌细胞株BGC-823,利用免疫荧光观察其转染效率。用RT-PCR、Western blot方法检测转染细胞GMⅡ、CD44及E-selectinmRNA和蛋白表达水平的变化。用MTT比色试验测定胃癌细胞在细胞外基质上黏附能力的变化。通过胃癌细胞对Rose Bengal的摄取测定其与血管内皮细胞黏附能力的变化。  结果:成功将GMⅡ-shRNA真核表达质粒载体转染至人胃癌细胞株BGC-823。转染后胃癌细胞GMⅡ及CD44的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05)。而E-selectin的mRNA及蛋白水平变化均不明显,无统计学意义。MTT比色试验结果显示,转染GMⅡ-shRNA真核表达质粒组细胞的黏附数在不同时间点均低于转染空载体组和空白对照组(P<0.05),而转染空载体组与空白对照组差异不大,无统计学意义。胃癌细胞与血管内皮细胞黏附试验结果显示,转染GMⅡ-shRNA真核表达质粒组细胞的吸光度A值明显低于转染空载体组和空白对照组(P<0.05),而转染空载体组与空白对照组的吸光度A值差异不大,无统计学意义。  结论:沉默GMⅡ后,胃癌细胞BGC-823的黏附活性明显降低,同时CD44 mRNA和蛋白表达明显下降,提示GMⅡ可能通过下调CD44的表达来影响胃癌细胞的黏附作用,但GMⅡ与E-selectin是否存在相关性不能确定。GMⅡ与胃癌的发生和发展密切相关,以此为切入点或许可以为临床胃癌治疗提供新思路。
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