论文部分内容阅读
糖尿病及其并发症严重危害人类健康。对于糖尿病患者，胰岛素干预作为替代或补充治疗是最直接有效的方法。胰岛素药物历经80多年的发展，从早期的动物胰脏中提取动物胰岛素，到现在的生物合成人胰岛素以及人胰岛素类似物，胰岛素药物一直具有广阔的发展前景。 本实验室将人胰岛素原基因整合到甲醇营养型酵母巴斯德毕赤酵母中，构成基因工程菌，诱导表达重组人胰岛素原。首先对基因工程菌进行重悬培养，SDS-PAGE和Western blotting检验得表达的蛋白分子量与理论分子量吻合，并且具有胰岛素的免疫原性。 对基因工程菌发酵过程的研究得出的结论为：工程菌发酵生长阶段菌体的生长与限制性基质甘油残留浓度的关系符合Monod关系式，菌体生长维持系数m=0.007g／g·h，说明本株菌就细胞高密度培养来说是一株优良菌，具有高密度培养的潜力；在优化工程菌的发酵条件和基础盐培养基配方的基础上，研究了工程菌的诱导策略，使蛋白的表达量提高了一倍多。利用优化了的摇瓶培养条件进行10L发酵罐的上罐试验，蛋白产量是摇瓶发酵蛋白产量的5倍多。 对表达的重组人胰岛素原的后分离纯化步骤研究得到了优化