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高效多酶催化体系在生物领域被广泛研究，深入研究及完善多酶催化体系具有很大的发展潜力并创造价值。本文通过无缝连接直接融合和内含肽介导融合构建多酶催化体系，即DAAO和VHb复合酶催化体系、DAAO、VHb和TH复合酶催化体系。通过对这两种复合酶催化体系的研究，为多酶催化在工业应用方面提供有用的参考价值。 1、本文首先利用分子生物学、基因工程操作手段，采用两种不同方式成功构建DAAO和VHb融合表达菌，即表达菌BL21(DE3)/pET28a-DAAO-VHb、BL21(DE3)/pETDuet-1-VHb-IN-IC-DAAO。研究确定表达菌最佳复合酶诱导条件。表达菌B L21(DE3)/pET28 a-DAAO-VHb最佳为诱导条件为在25℃、装液量为50％时，以0.1 mM IPTG浓度诱导8h。表达菌BL21(DE3)/pETDuet-1-VHb-IN-IC-DAAO最佳诱导条件为在25℃、装液量为40％时，以0.1 mM IPTG浓度诱导8h。在最佳诱导条件下培养菌体，通过His-tag纯化的方法得到纯酶。通过复合酶比酶活测定，复合酶p28-DV、DU-DV比酶活与单DAAO酶相比分别提高1.8倍和2.13倍。圆二色谱分析蛋白二级结构，复合酶DU-DV组分α-螺旋含量高于p28-DV含量，与比酶活测定结果保持一致。 2、相似的原理及技术手段被用于构建VHb、TH、DAAO复合酶表达菌，即BL21(DE3)/pET28a-DAAO-VHb-TH、BL21(DE3)/pETDuet-1-TH-IN-IC-DAAO-VHb、BL21(DE3)/pETDuet-1-VHb-TH-IN-IC-DAAO。研究确定表达菌最佳诱导条件。菌BL21(DE3)/pETDuet-1-TH-IN-IC-DAAO-VHb没有表达目的蛋白。表达菌BL21(DE3)/pET28a-DAAO-VHb-TH最佳诱导条件为在25℃、装液量为50％时，以0.1 mM IPTG浓度诱导8h。表达菌BL21(DE3)/pETDuet-1-VHb-TH-IN-IC-DAAO最佳为诱导条件为在25℃、装液量为30％时，以0.4 mM IPTG浓度诱导8h。在其最佳诱导条件下培养之后收集菌体，通过多聚组氨酸标签纯化法得到纯酶，对其酶活进行了测定。剪接产物DU-VTD具有底物L-Tyr催化活性，而融合蛋白p28-DVT没有底物L-Tyr催化活性。 综上所述，就本章实验而言，不同融合构建方式不单影响蛋白差异表达，还会影响复合酶活性。与无缝连接融合技术相比，内含肽介导融合方式对复合酶的结构影响更小，更有利于构建酶连续催化体系。