新型PEG亚胺衍生物共聚物改性聚乳酸材料的细胞相容性评价

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改性聚乳酸材料与单纯的PLA材料相比在理化性能及生物应用等方面具有明显的优势,因此成为组织工程材料研究的热点。本研究是将具有良好生物性能的聚乙二醇(PEG)单体引入到聚乳酸中,结合均苯四甲酸酐共聚形成了PAP单体,进一步缩合反应生成了PAP-PLA共聚物。首先,采用静态水接触角及吸水率对材料的亲/疏水性进行了研究,其次对降解产物PAP片段及PMA的细胞相容性进行了考察,同时对PAP-PLA材料膜的细胞相容性进行了评价,主要检测了细胞的粘附及铺展形态、细胞的增殖、细胞的分化及矿化等,其中细胞的粘附及铺展状态以显微镜及激光共聚焦观察,细胞增殖通过CCK-8试剂盒检测,细胞分化通过对碱性磷酸酶(ALP)的检测来考察,而细胞矿化通过茜素红法及胶原分泌量来检测。实验得出以下主要结论:①材料的静态水接触角及吸水率的实验结果表明,PAP-PLA共聚物材料的亲水性相较于PLA材料有明显的改善,亲/疏水性能合适,而且其亲疏水性能可以通过调节嵌段的不同比例进行调解,这为材料在组织工程领域的应用奠定了基础。同时,由于PAP-PLA共聚物材料中所具有的多数结构及基团较为常见,具有良好的细胞相容性,而聚酰亚胺由于研究较少,包括其降解产物PMA在内的细胞相容性问题都还有待于检测。②原代成骨细胞的培养与鉴定实验表明,获取的原代成骨细胞形态良好,细胞增殖分化活性高,且具备了矿化能力,适合进行相关细胞实验。③采用浸提液法直接考察了合成材料中新型嵌段PAP的细胞相容性。结果表明,使用PAP浸提不同天数的浸提液培养的细胞与对照组相比,细胞的形态、增殖、分化矿化等均表现正常,该材料表现出良好的细胞相容性。④同时采用浸提液法考察了合成材料的降解产物PMA的细胞相容性。即将PAP和两组不同PAP-PLA样品完全降解后可能产生的最大量降解产物PMA浸提于培养液中用于培养成骨细胞,结果表明,PAP降解后产生的PMA与对照组相比其分化活力略有下降,但增长趋势相同,而PAP-PLA样品组完全降解产生的PMA与对照组不论是形态、增殖和分化都没有明显差异。这些结果表明PAP-PLA材料降解产物中的PAP片段及PMA没有明显的细胞毒性,具有良好的细胞相容性。⑤对PAP-PLA材料膜上的细胞粘附及铺展形态的检测表明,过于亲水或疏水的表面都不利于细胞的粘附,其中PAPD4/20与PAPD4/25两种材料的亲疏水性适中,细胞的粘附及铺展状态较好,而PAPD4/15与PLA材料则相对较差。⑥对PAP-PLA材料膜上的细胞的增殖检测表明,细胞在PLA上的增殖速率低于PAPD4/20和PAPD4/25,细胞在PAP-PLA材料的增殖状况良好,其在各组材料表面上的增殖速率均呈上升趋势。⑦对PAP-PLA材料膜上的细胞分化和矿化实验检测表明,细胞在PAP-PLA共聚物材料上的分化、矿化及胶原分泌等都较PLA材料要好。通过以上的检测表明,PAP-PLA共聚物材料的细胞相容性良好,这为本改性聚乳酸材料及其他潜在的PAP改性材料的生物相容性评价提供了良好的借鉴。
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