【摘 要】
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日益发展的社会经济和恶化的环境要求我们运用分子生物学技术改良农作物的抗逆性.但植物的抗逆机制十分复杂,涉及到一系列形态和代谢过程的变化,转化单个基因往往只能获得部
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日益发展的社会经济和恶化的环境要求我们运用分子生物学技术改良农作物的抗逆性.但植物的抗逆机制十分复杂,涉及到一系列形态和代谢过程的变化,转化单个基因往往只能获得部分的抗逆性.然而,DREB(Dehydration Responsive Element Binding)转录因子被逆环境胁迫诱导产生后,可激活其他多达12个依赖DRE顺式作用元件的抗逆功能基因,如rd29A、cor15a、rd17,并能引起脯氨酸及蔗糖含量的提高,从而使植株多方面的抗逆性(抗旱、抗冻及抗盐)得到提高.提取4℃冷胁迫2小时的黑麦黄化苗总体RNA,根据已发表的DREB基因的保守序列设计引物做RT-PCR,扩增出一条436bp的片段,克隆并测序,经BLASTn比对后发现该基因片段与国外已发表的一个黑麦DREB基因(gi|17148648)有94％的同源性.该片段已在GenBank上登录,登录号为gi|32478752.再根据该片段序列设计引物,做cDNA3末端快速扩增(3RACE)获得了该基因的3端.将gi|32478752片段和3RACE片段拼接后的全长为731bp(3个已发表的黑麦DREB基因的编码区长800~900bp),BLASTn分析的结果表明它与黑麦DREB基因gi|17148650有96％的同源性.利用5-Full Race Core set试剂盒做cDNA 5末端快速扩增(5RACE),扩增出一条长724bp的片段,但克隆测序并比对后显示它与水稻的甲酰甘氨酰胺核苷酸氨基转移酶基因(gi|34907487)有88％的可源性.提取小麦基因组DNA,做PCR(引物同gi|32478752),扩增出一条292bp的片段,克隆并测序,BLASTn比对后发现与一个大麦DREB基因有90％的同源性.该片段也己在GenBank上登录,登录号为gi|37963459.根据小麦、大麦和黑麦中的6个DREB基因所编码的蛋白质序列,设计了一对简并引物.利用这对简并引物从小麦基因组中扩增出一条长614bp的片段,克隆测序,BLASTx分析后认为它的405~611位核苷酸所编码的氨基酸链与一个玉米的吉卜塞型(gypsy-type)反转录转座子RIRE2有41％的相似性.利用同样的简并引物从簇毛麦基因组中扩增出一条长744bp的片段,克隆测序,BLASTx分析后认为它的418~719位核苷酸所编码的氨基酸链与一个水稻的反转录转座子RIRE2有46％的相似性.
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