端粒酶逆转录酶TERT促进人喉癌细胞Hep-2增殖作用及机制的研究

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目的:研究端粒酶逆转录酶(TERT)在喉癌细胞增殖过程中的作用,研究c-fos和c-jun二联体在TERT促进喉癌细胞增殖过程中的作用。方法:CCK-8法分别检测Ad-TERT和Ad-shTERT腺病毒载体处理前后的喉癌Hep-2细胞增殖能力的变化;real-time PCR法检测Ad-TERT和Ad-shTERT腺病毒载体处理前后的喉癌Hep-2细胞中TERT、c-fos以及c-jun mRNA的表达;RT-PCR法检测32例喉癌组织中TERT、c-fos和c-jum mRNA的表达;量子点标记免疫荧光法检测54例喉癌组织切片中TERT、c-fos和c-jun蛋白的表达;spearman相关性检验比较TERT与c-fos、c-jun表达的相关性。结果:Ad-TERT腺病毒载体处理后,Hep-2细胞的增殖速率增加55%, TERT mRNA表达分别增加59%, c-fos mRNA表达分别增加52%,c-jun mRNA表达分别增加51%。Ad-shTERT腺病毒载体处理后,Hep-2细胞的增殖速率降低46%、。TERT mRNA表达分别减少70%, c-fos mRNA表达分别减少79%, c-jun mRNA表达分别减少71%。RT-PCR法检测32例喉癌组织中TERT/actin mRNA表达比值为(0.003~0.969), c-fos/actin mRNA表达比值为(0.001-2.768),c-jun/actin mRNA表达比值为(0.015-1.587), spearman相关性检验比较TERT/actin与c-fos/actin mRNA表达相关系数r=0.659(P<0.01),TERT/actin与c-jun/actin mRNA表达相关系数r=0.763(P<0.01),c-fos/actin与c-jun/actin mRNA表达相关系数r=0.929(P<0.01)。量子点标记免疫荧光法检测54例喉癌组织切片中TERT与c-fos、c-jun表达部位一致率分别为85%和82%,TERT表达阳性率为(36%-61%),c-fos表达阳性率为(32%-55%),c-jun表达阳性率为(40%-67%),spearman相关性检验比较TERT与c-fos蛋白表达相关系数r=0.712(P<0.01),TERT与c-jun蛋白表达相关系数r=0.683(P<0.01),c-fos与c-jun蛋白表达相关系数r=0.958(P<0.01)。结论:TERT在促进喉癌细胞增殖过程中发挥了非常重要的作用,靶向沉默TERT mRNA后c-fos和c-jun mRNA表达均明显降低,过表达TERT后c-fos和c-jun mRNA表达均明显增高。c-fos和c-jun的表达呈高度相关,与文献中报道c-fos和c-jun通常是以二联体形式存在一致。c-fos、c-jun与TERT在喉癌中的表达呈中-高度相关,且相关性具有显著统计学意义,我们推测在TERT促进喉癌细胞增殖的过程中,c-fos和c-jun二联体发挥了重要的作用,但其具体机制仍需进一步研究。
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