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目的观察电针联合丰富康复训练调控勿动蛋白受体复合体干预脑缺血神经再生的效应。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,选取健康雄性清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠90只,随机分为假手术组、模型组、电针组、丰富康复组及电针联合丰富康复训练组(针康组)。模型组、假手术组不予任何治疗,电针组采用电针治疗,丰富康复组采用丰富环境和康复训练(平衡木、转棒、网屏)治疗,针康组采用电针联合丰富康复训练治疗,分别于3d,7d,14d后处死取材。采用神经功能缺损评分观察各组术后4h,3d,7d,14d大鼠神经功能缺损情况;采用行为学功能评分观察各组大鼠术后4h,3d,7d,14d行为学功能改变情况;采用TTC染色法检测脑梗死体积;采用透射电镜观察术后14d各组大鼠缺血侧皮层和海马神经元及突触超微结构的变化;采用HE染色法检测术后14d各组大鼠缺血侧大脑皮质和海马的病理组织学变化;采用免疫组织化学法检测术后14d各组大鼠缺血侧大脑皮质和海马勿动蛋白受体复合体(Ng R、LINGO-1、p75NTR、TROY)表达的变化。结果1.神经功能缺损程度评分:假手术组术后各时间点(4h,3d,7d,14d)的神经功能缺损程度评分均为0分;与假手术组相比,模型组各个时间点(4h,3d,7d,14d)的神经功能缺损程度评分均显著高于假手术组,差异具有统计学意义(P<0.01);术后4h,3d,电针组、丰富康复训练组与针康组神经功能缺损程度评分均低于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);术后7d、14d,与模型组比较,电针组、丰富康复训练组与针康组神经功能缺损程度评分均显著低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与丰富康复训练组和电针组比较,针康组神经功能缺损程度评分显著低于丰富康复训练组和电针组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.行为学功能评分:(1)平衡木行走测评与假手术组相比,模型组各个时间点(4h,3d,7d,14d)的平衡木行走测评评分均显著高于假手术组,且差异具有统计学意义(P<0.01);术后4h,3d,与模型组比较,电针组、丰富康复训练组和针康组平衡木行走测评评分均低于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);术后7d、14d,丰富康复训练组、电针组与针康组较模型组平衡木行走测评评分均显著降低,且差异具有统计学意义(P<0.01);与电针组比较,丰富康复训练组和针康组平衡木行走测评评分均显著低于电针组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);针康组平衡木行走测评评分显著低于丰富康复训练组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)转棒行走测评与假手术组相比,模型组各个时间点(4h,3d,7d,14d)的转棒行走测评评分均显著高于假手术组,且差异具有统计学意义(P<0.01);术后4h,3d,与模型组比较,电针组、丰富康复训练组转棒行走测评评分均低于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05),而针康组转棒行走测评评分显著低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);术后7d、14d,丰富康复训练组与针康组转棒行走测评评分显著低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01);与电针组比较,丰富康复训练组和针康组转棒行走测评评分均显著低于电针组,差异具有统计学意义(P<0.01);与丰富康复训练组比较,针康组转棒行走测评评分低于丰富康复训练组,但差异无统计学意义(P>0.05)。(3)网屏测评与假手术组相比,模型组各个时间点(4h,3d,7d,14d)的网屏测评评分均显著高于假手术组,且差异具有统计学意义(P<0.01);术后4h,3d,与模型组比较,电针组、丰富康复训练组与针康组网屏测评评分均低于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);术后7d、14d,丰富康复训练组与针康组网屏测评评分均显著低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01);与电针组比较,丰富康复训练组和针康组网屏测评评分均显著低于电针组,差异具有统计学意义(P<0.01);与丰富康复训练组比较,针康组转棒行走测评评分低于丰富康复训练组,但差异无统计学意义(P>0.05)。3.脑梗死体积检测:假手术组无梗死灶,模型组梗死灶明显,经过治疗后,各干预组脑梗死体积缩小;术后3d,与模型组比较,电针组、丰富康复训练组与针康组脑梗死体积均小于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);术后7d、14d,与模型组比较,电针组、丰富康复训练组与针康组脑梗死体积均显著小于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),与丰富康复训练组和电针组比较,针康组脑梗死体积显著小于丰富康复训练组和电针组,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.缺血侧皮质和海马神经元及突触结构:模型组可见缺血区皮层和海马神经元形态不规则,神经毡内突触明显减少,细胞边界不清或消失,细胞空泡样变,线粒体肿胀,嵴变形扭曲甚至断裂,粗面内质网扩张,突触前后膜不清晰,突触前终末不清,突触小泡数量显减少。各干预组均能使缺血区皮层和海马神经元胞膜完整,促进神经毡内突触数量增多,改善线粒体、粗面内质网结构,改善神经元凋亡和坏死。针康组保护缺血区皮层和海马神经元和突触超微结构效果更明显。5.病理组织学观察:假手术组,脑组织层次分明,神经细胞形态结构正常;模型组,脑组织水肿明显,结构疏松,细胞排列紊乱,空泡样改变明显,细胞核固缩深染,核仁消失等病理变化。术后14d,各干预组大鼠缺血侧皮质和海马病理改变均有不同程度的减轻。术后14d,针康组大鼠缺血侧皮质和海马周围炎性浸润较其他治疗组减轻明显,神经元数量有所增加,变形、坏死神经元减少,损伤明显减轻。6.勿动蛋白受体复合体各组分(NgR、LINGO-1、p75NTR、TROY)的变化(1)NgR:脑缺血后缺血侧皮层和海马NgR阳性细胞数明显增高,假手术组可见Ng R阳性产物少量的表达。模型组Ng R阳性细胞数显著高于假手术组,且差异具有统计学意义(P<0.01);电针组、丰富康复训练组和针康组Ng R阳性细胞数均显著低于模型组,且差异具有统计学意义(P<0.01);与电针组和丰富康复训练组比较,针康组Ng R阳性细胞数显著低于电针组和丰富康复训练组,且差异具有统计学意义(P<0.01)。(2)LINGO-1:脑缺血后缺血侧皮层和海马LINGO-1阳性细胞数明显增高,假手术组可见LINGO-1阳性产物少量的表达。模型组LINGO-1阳性细胞数显著高于假手术组,且差异具有统计学意义(P<0.01);电针组、丰富康复训练组和针康组LINGO-1阳性细胞数均显著低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01);与电针组和丰富康复训练组相比较,针康组LINGO-1阳性细胞数均显著低于电针组和丰富康复训练组,且差异具有统计学意义(P<0.01)。(3)p75NTR:脑缺血后缺血侧皮层和海马p75NTR阳性细胞数明显增高,假手术组可见p75NTR阳性产物少量的表达。模型组p75NTR阳性细胞数显著高于假手术组,且差异具有统计学意义(P<0.01);电针组、丰富康复训练组和针康组p75NTR阳性细胞数均显著低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01);与电针组和丰富康复训练组相比较,针康组p75NTR阳性细胞数显著低于电针组和丰富康复训练组,且差异具有统计学意义(P<0.01)。(4)TROY:脑缺血后缺血侧皮层和海马TROY阳性细胞数明显增高,假手术组可见TROY阳性产物少量的表达。模型组TROY阳性细胞数显著高于假手术组,且差异具有统计学意义(P<0.01);电针组、丰富康复训练组和针康组TROY阳性细胞数均显著低于模型组,且差异具有统计学意义(P<0.01);与电针组和丰富康复训练组相比较,针康组TROY阳性细胞数显著低于电针组和丰富康复训练组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论1.电针联合丰富康复治疗能促进局灶性脑缺血后大鼠神经功能重建,优于单纯电针治疗与丰富康复治疗;2.电针联合丰富康复治疗能提高局灶性脑缺血大鼠平衡、行走及抓握能力,增加患肢肌力优于单纯电针治疗,在提高平衡能力方面优于丰富康复治疗;3.电针联合丰富康复治疗能够缩小局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积,优于单纯电针治疗与丰富康复治疗;3.电针联合丰富康复治疗能够改善大鼠缺血区皮层和海马神经元、突触超微结构和脑组织病理改变,优于单纯电针治疗与丰富康复治疗;4.电针联合丰富康复治疗能够下调大鼠缺血区皮层和海马NgR、LINGO-1、p75NTR、TROY的表达,降低勿动蛋白受体复合体的形成,阻止轴突生长锥体坍塌和促进神经生长,这可能是电针联合丰富康复治疗法促进脑缺血后神经功能重塑的相关机制之一。