本文首先从中国大鲵体内分离出了一株病原性嗜水气单胞菌Ah2,通过筛选得到了一株对其具有抑制作用的后生元菌株——产细菌素类植物乳杆菌M4L1,随后进行了该菌株的抑菌理化特性探究和全基因组序列表征的分析。最后对该菌株产生的细菌素LP01进行了分离纯化与鉴定,同时评估了该细菌素的抑菌范围、抑菌强度及抑菌效果。现将研究结果概述如下:1.中国大鲵疾病病原菌的分离与鉴定本章旨在确定引起陕西某大鲵养殖场大鲵死亡的病原。经过细胞毒性试验和GSIV主要衣壳蛋白基因扩增试验,排除了病毒性病原的可能;其次通过梯度稀释和平板涂布法从大鲵病灶组织分离纯化得到10株细菌,溶血试验检测到其中有一株腹水源细菌具有β-溶血性,经鉴定为致病性嗜水气单胞菌;对健康大鲵进行该疑似病原的人工感染试验后,大鲵在一周左右出现活动异常、两周后呈现出不同程度的体表溃疡,最终确定感染大鲵的主要病原为嗜水气单胞菌并命名其为Ah2。耐药性检测结果显示,该菌对检测中10种常见抗生素的5种均不敏感,Ah2具有较强的耐药性。2.产细菌素优良乳酸菌的筛选与菌株全基因组序列分析本章旨在以中国大鲵病原嗜水气单胞菌为指示菌筛选出一株产细菌素优良乳酸菌,研究该菌所产细菌素的理化特性并分析该菌全基因组序列。通过打孔法结合双层平板法从青岛市售腐乳中筛出了一株产细菌素类植物乳杆菌M4L1。利用10种常见抗生素评估其药敏特性后发现,该菌对测试的10种抗生素的6种具有高度及中度敏感性;经分析M4L1生长曲线和细菌素产量的动态变化发现,当菌株的生物量达到最大值时,其抑菌活性也达到了峰值,M4L1的生物量与其细菌素产量呈正相关;采取有机溶剂萃取法初步纯化M4L1所产的细菌素并命名为LP01。抑菌理化特性研究结果表明,细菌素LP01不仅在p H 2～10、-20～121℃以及9个月贮藏期内均表现出较稳定的抗菌活性,还具有良好的消化酶和表面活性剂耐受性;紫外全波长扫描发现LP01的肽类特征吸收峰显著,LP01为肽类细菌素。此外,借由Illumina Hi Seq2000平台进行M4L1全基因组序列测定并挖掘其中的毒力、耐药基因、致病因子及潜在的细菌素基因簇。经验证M4L1中不包含任何致病因子且被预测为非人类病原体;另外基因注释到M4L1有2个细菌素基因簇（Ri PPs）,其对应产物分别为Plantaricin K和Plantaricin E,均属于植物乳植物杆菌的II类细菌素。作为一株生物安全菌株,类植物乳杆菌M4L1具备良好的产细菌素能力。3.类植物乳杆菌产细菌素LP01的分离纯化与抑菌表征的探究本章旨在以细菌素LP01为研究对象,对其进行分离纯化与抑菌表征的探究。Tricine-SDS-PAGE测定出LP01的分子量在3.3～4.0 k Da内,确定LP01为小分子肽类细菌素;先后采用G-25凝胶过滤色谱、DEAE-52阴离子交换色谱、反相高效液相色谱得到较高纯化水平的细菌素LP01;质谱分析结果显示,MALDITOF/MS测出LP01的具体分子量为3748.9643 k Da,Q-TOF-MS/MS预测出其34个氨基酸序列为HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKKKKEFLAWLVPVNV,数据库未匹配到已知乳酸菌细菌素,推测LP01为类植物乳杆菌产生的新型细菌素。抑菌谱测定结果显示,LP01对测试中的鲍曼不动杆菌、单增李斯特菌、弗氏柠檬酸杆菌等14株革兰氏阳性和阴性菌均有不同程度的抑制作用,细菌素LP01具有较广的抑菌谱;另外,LP01对Ah2的MIC和MBC分别为12.94μg/m L和25.88μg/m L。溶血活性检测与细胞毒性试验发现,经MIC和MBC处理的Ah2,溶血活性和细胞毒性均有明显下降;通过SEM观察LP01作用Ah2前后显微结构变化。结果表明,细菌素LP01破坏了Ah2菌体的细胞结构,促使了细胞空洞、凹陷的形成和细胞内容物的溶出,细胞破裂死亡。综上,新型细菌素LP01对嗜水气单胞菌Ah2具有显著的抑菌效果。以上研究结果揭示,类植物乳杆菌M4L1及其新型细菌素LP01不仅有望成为应对水产养殖动物病害的防治药物,还可作为生物防腐剂用来控制食品中存在的多药耐药菌株,甚至为人类疾病防治药物的筛选提供了新方向。综上所述,产细菌素类植物乳杆菌M4L1作为一种潜在的后生元候选物具有巨大的应用前景。