几株微藻制备生物柴油的关键技术研究

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本论文以栅藻(Scenedesmus sp.)、小球藻(Chlorella sp.)和Picochlorum sp.为实验材料,从微藻培养优化、藻细胞采收、油脂提取等技术环节开展研究。首先对微藻培养基进行优化,确立了最优培养基;在此基础上进行了低磷间歇补加培养的研究,通过转录组分析,找出与脂质代谢密切相关的基因,初步探索了微藻油脂积累机制;采用絮凝法采收微藻,并对絮凝机理进行分析;最后建立了一种新的油脂提取方法,并讨论分析了油脂提取的机制。主要研究结果如下:  (1)通过响应面法优化培养基发现NaHCO3,NaH2PO4·2H2O和NaNO3对栅藻(Scenedesmus sp.)油脂产量有显著影响。最优培养基为:NaHCO3,3.07 gL-1; NaH2PO4·2H2O,0.01549gL-1; NaNO3,0.80321 gL-1; CaCl2,0.02gL-1;MgSO4·7H2O,0.05gL-1; KCl,0.1 gL-1; A5,1mLL-1; EDTA-Fe3+,1 mLL-1;Soil extract,1mLL-1。优化后栅藻油脂产量为304.02 mg L-1,比优化前提高了54.64%。  (2)栅藻的最佳补磷策略是每2天补加2 mg L-1 NaH2PO4·2H2O,在此条件下,油脂含量1和油脂产量2分别达到40%DW和350mg L1,比优化前提高了84.21%。采用转录组测序技术(RNA-seq技术),首次对栅藻转录组进行测序,初步推测脂肪酸和三脂酰甘油(Triacylglycerol,TAG)合成途径。此外,找到了与脂质合成代谢相关的差异表达基因,如KAS,DGAT等。推测低磷能够促进碳水化合物分解并抑制其合成,同时促进碳流向脂质合成途径,从而提高油脂产量。  (3)栅藻在培养过程中pH能不断上升,发生自絮凝。因此,采用pH介导絮凝采收法浓缩海水小球藻(Chlorella sp.),添加5mM NaOH,絮凝10min,采收率约为90%,采收后上清液可回收利用。在采收过程中,添加Fe3+采收率显著提高,而且在采收后培养基中Fe3+浓度明显下降,推测Fe3+参与了絮凝过程。此外,该方法对海水小球藻的油脂得率3和脂肪酸成分没有显著影响,说明pH介导絮凝采收法适合采收Chlorella sp.用于制备生物柴油。  (4)建立了一种高效环保的新油脂提取方法(乙醇提取法):在常温常压下,每1克湿藻中添加5mL乙醇,轻微搅拌,提取37min,Picochlorum sp.122油脂得率为33.04%DW,与传统Bligh-Dyer方法的结果一致。此外,两种方法提取到的脂肪酸组成和油脂成分无显著差异,表明乙醇提取法能够用于提取湿藻Picochlorum sp.122的油脂。  (5)乙醇提取法适用于其它几株微藻(Picochlorum sp.802,Chlorella sp.442,Chlorella sp.725)。扫描电镜显示当采用乙醇提取法时,微藻细胞严重受损,细胞破碎率为19%~25%,推测油脂主要是通过受损细胞表面的裂缝和凹槽释放出来,其次才是细胞裂解。  (6)6株微藻(Scenedesmus sp.,Picochlorum sp.122,Picochlorum sp.802,Chlorella sp.615,Chlorella sp.442,Chlorella sp.725)的主要脂肪酸都是C16-C18,中性脂含量高于50%,所制备的生物柴油符合欧盟标准,表明这6株微藻都是制备生物柴油的较理想藻株。
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