白藜芦醇(Resveratrol,RES)是一种含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物,对肝癌细胞有一定的抗癌活性,但是白藜芦醇水溶性差、稳定性差、生物利用度低、体内半衰期短等特性限制了其在体内发挥良好的生物活性。研究表明甘草酸对肝脏表面有生物靶向性,因肝细胞表面有甘草酸受体,所以将甘草酸与人血清白蛋白偶联成纳米粒载体(GL-HSANPs),可增加药物的主动靶向性。进一步采用高压均质乳化法实现对白藜芦醇的包载,制备出甘草酸偶联的白藜芦醇白蛋白纳米粒(GL-HSA-RESNPs),目的是制备出对肝癌细胞具有主动靶向性的RES纳米靶向制剂,同时提高RES生物利用度。本实验结合了纳米技术研究制备了 GL-HSA-RESNPs纳米粒,在制备工艺优化设计中,粒径大小是选择最优条件的重要标准,因此考察了制备过程中的人血清白蛋白浓度、水相与有机相体积比、匀浆转速与匀浆时间、均质压力与均质次数对粒子大小的影响,运用激光粒度分析仪检测GL-HSA-RESNPs粒径大小;扫描电镜和透射电镜检测考察纳米颗粒的表面形态;高效液相色谱法检测白藜芦醇纳米制剂的包封率、载药量、体外释放性能;用傅利叶变换红外光谱、X-射线衍射、差示扫描热量法、热重分析考察纳米粒的固体表征;用体外细胞活性实验(MTT)和体内靶向性实验分别考察了 GL-HSA-RESNPs对肝癌细胞HepG2的抑制效果及体内纳米粒的肝靶向性;大鼠尾静脉注射白藜芦醇纳米药对体内生物利用度和体内组织分布进行考察。考察结果如下:1、利用红外光谱检测法对甘草酸偶联人血清白蛋白纳米粒进行检测并检测出特征峰,并且酰胺键的吸收峰增强,说明甘草酸与人血清白蛋白偶联成功;制备出的甘草酸偶联的人血清白蛋白纳米粒,甘草酸的偶联量为112.56 μg/mg。2、正交试验与单因素实验筛选出最优条件:人血清白蛋白浓度为4 mg/mL,水相与有机相体积比为9:1,匀浆转速为8000 rpm,匀浆时间为5 min,均质压力为800 bar,均质次数为9次。最优条件下制备出的GL-HSA-RESNPs的平均粒径为108.1 ±5.3 nm,包封率和载药量分别为83.6%和11.5%。经过SEM观察,纳米粒呈现分散均匀的类球形。经过固体状态分析,白藜芦醇以无定形态包载于甘草酸偶联的人血清白蛋白纳米粒中。在考察药物的体外释放度试验中表明了 GL-HSA-RESNPs具有持续释放的特性,并且水溶性有显著性的提高。3、通过白藜芦醇纳米粒对体外肝癌细胞抑制实验与靶向性作用的研究,以及体内的肝靶向实验的验证得出,药物与HepG2细胞作用48小时后GL-HSA-RESNPs与RES原药的半数致死剂量分别为62.5 μg/mL和95.5 μg/mL,因此GL-HSA-RESNPs会具有更好的治疗效果。在激光共聚焦显微镜下观察,样品的荧光强度大小为GL-HSA-RESNPs>HSA-RESNPs>GL 与 HSA-RESNPs>RES 原药>空白,显示出 GL-HSA-RESNPs具有一定的主动靶向性;通过小动物活体成像仪对H22原位移植模型鼠进行检测药物在体内的分布和走向趋势。Cy5活性染料标记的GL-HSA-RESNPs的水溶液,通过肝癌模型小鼠的尾静脉注射体内,与注射同等剂量的健康小鼠相比在肝脏的荧光强度大而且持久,GL-HSA-RESNPs有明显的肝癌靶向作用。4、白藜芦醇纳米药大鼠尾静脉注射的药代动力学研究:实验组中大鼠体内的白藜芦醇药物浓度一直高于对照组中大鼠体内白藜芦醇的药物浓度。实验组中白藜芦醇纳米粉经尾静脉注射后在大鼠体内的分布半衰期t1/2α为2.997 h,生物半衰期t1/2β为8.778h。对照组中白藜芦醇原粉经尾静脉注射在大鼠体内的分布半衰期t1/2α为1.794 h,生物半衰期t1/2β为5.501 h。纳米药组在大鼠体内的平均滞留时间(MRT)是原药组的1.01倍。白藜芦醇纳米粒在体内消除的速率要高于白藜芦醇原粉。白藜芦醇纳米粒在大鼠体内的AUC值是白藜芦醇原粉的1.7倍。由实验结果可知,白藜芦醇纳米粒的生物利用度明显提高。5、考察大鼠尾静脉注射白藜芦醇纳米粉和原粉,于0.5、1、3、6、12、48 h不同时间各组织中白藜芦醇的浓度。结果显示,纳米药物在主要脏器中的吸收明显高于原药,尤其在肝部的药物积累比较明显,纳米药与原药相比在肝部药物的吸收有明显的差别,纳米药在肝部的积累浓度与积累时间远远大于原药,说明白藜芦醇纳米粒有明显的肝靶向性。白藜芦醇纳米粉在肝脏中的MRT值是白藜芦醇原粉的1.5倍。白藜芦醇纳米粉在肝脏中的AUC值是白藜芦醇原粉的4.17倍。白藜芦醇纳米粉对大鼠肝组织具有靶向性,意味着白藜芦醇纳米药在临床上对肝病有望成为一种新型注射类药物。