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衰老是植物生命周期中必须经历的阶段,是细胞、组织、器官以及整株植株成熟后功能逐渐衰退直至终止生命活动的程序性细胞死亡过程。叶片衰老是一种器官水平上的衰老,而且与细胞、组织上的衰老过程密切相关。研究表明,叶片衰老的延迟或加速能够影响作物的产量和品质,同时可以影响作物对于干旱等胁迫的耐受性。黑暗方法诱导离体叶片衰老不仅能够一定程度上模拟田间叶片的衰老过程,且具有实验周期短、条件可控、重复性好等明显优势。目前在C4作物中,采用黑暗处理方法,研究离体叶片衰老的报道不多,体系尚不完善,限制了衰老调控基因的鉴定和分子机理的深入研究。 高粱(Sorghum bicolour L.Moench)是一种重要的C4植物,其叶片的衰老以及持绿性研究一直都受到广泛的关注。本研究选取高粱作为植物材料,采用离体叶片黑暗处理方法,通过跟踪拍照手段,获取并量化离体叶片处理过程中持绿面积的变化,建立黑暗诱导离体叶片衰老的实验体系。以此为基础,分析207份高粱自然品种离体叶片在黑暗条件下的衰老启动和衰老速率的变化,并分析其叶片衰老模式。同时,结合本实验室已有的高粱自然品种的基因型数据,通过关联分析方法,初步鉴定调控离体叶片衰老启动和衰老速率的重要遗传位点。 本文主要结果如下: 1、构建和优化了高粱黑暗诱导离体叶片衰老的实验体系:以68个高粱自然品种为实验材料,分析第6、8、10片叶完全展开后,在黑暗处理条件下的衰老情况,并通过拍照方法获取并量化叶片衰老模型,通过四次重复实验,确立了第10片叶,处理10天为最优选择; 2、分析了207个高粱自然品种,在黑暗培养条件下离体叶片衰老表型变化,根据不同品种间叶片衰老启动和衰老速率的差异,确定了暗培养条件下离体叶片的四种衰老模式; 3、结合本实验室75个高粱自然品种的基因型数据(包括SNP和PAVs)和叶片衰老启动及速率表型数据,利用关联分析方法,挖掘出控制衰老启动相关的9个潜在遗传位点以及衰老速率相关的8个潜在遗传位点; 4、对田间207个高粱自然品种,从10叶期开始,统计黄化叶片数占可见功能叶片数的比例,连续测量7周,运用SplinCluster方法对高粱整株的时序衰老情况进行聚类分析,建立了大田条件下高粱整株的衰老模式。