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种子和果实的发育是植物生殖过程中重要的内容。细胞分裂素的活性和浓度与种子的生长和果实的发育有密切关系,一般来说,细胞分裂素能促进座果、影响种子果实中同化物的积累及胚乳发育。从锦橙(Citrus sinensis cv Jincheng)中克隆得到的种子球蛋白基因的启动子(Jcitrin启动子)是种子特异性表达启动子。本文将Jcitrin启动子与ipt基因及GUS基因融合,构建了两个植物双元表达载体,并进行辣椒的遗传转化。期望通过对Jcitrin启动子的表达时间、部位、特点和效应的进一步研究,以探索细胞分裂素在植物种子和果实发育中的作用,从而实现用基因工程手段有目的地控制种子的发育。 作为一种常见的蔬菜,辣椒在亚洲、欧洲、中南美洲被广泛栽培。虽然同属茄科,但辣椒的组织培养要比番茄、茄子等困难得多,其组培技术也落后于许多其他蔬菜作物。本文拟通过建立辣椒高效的组织再生和遗传转化体系,提高其遗传转化的效率,为辣椒基因工程育种奠定技术基础。现将研究的主要工作和结果报道如下: 1.植物表达载体的获得 本文将Jcitrin启动子替换pCAMBIA2301中GUS基因上游的35S启动子,构建了植物双元表达载体pFL;同时,将种子特异性Jcitrin启动子和ipt基因融合,插入pCAMBIA2301的多克隆位点,构建了植物双元表达载体pMY。采用冻融法分别成功地将这两种双元表达载体转入农杆菌菌株LBA4404。 2.辣椒再生体系的建立 本研究优化了辣椒的两种再生体系。为了提高常规辣椒子叶再生体系的效率,通过多因子正交试验,筛选出辣椒最佳芽诱导培养基为MB+0.5 mg/L IAA+5.0mg/L BA,最佳外植体类型为子叶柄。研究发现,各因素对芽诱导的效应存在较人差异,外植体类型对芽诱导有