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研究背景:滤泡性淋巴瘤(Follicular lymphoma,FL)占所有非霍奇金淋巴瘤病例的20%至25%。大约5%的FL病例是双打击(Double Hit,DH)淋巴瘤,即涉及MYC(8q24.2)的染色体易位或与另一个重现型断点,通常为BCL2(18q21.3)。MYC/BCL2双打击淋巴瘤的患者临床表现倾向于侵袭性,经常累及骨髓和中枢神经系统。双打击滤泡性淋巴瘤(DH FL)细胞系的建立将增进我们对FL的了解和药物开发,但是目前仅有很少的DH FL细胞系。在这里我们建立了一个新的MYC/BCL2 DH FL细胞系。研究方法:从诊断为滤泡细胞淋巴瘤IV期的患者胸腔积液中提取单个核细胞,用含10%热灭活的胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液的1640培养基体外培养至140代,我们将它命名为FL-SJC细胞系。随后,检测该细胞系的一系列特征:1.用CCK8(Cell Counting kit-8)试剂盒检测其增殖性,同时与另外两个滤泡细胞淋巴瘤细胞系比较;2.通过R显带核型分析、荧光原位杂交技术(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)检测其细胞遗传学特征;3.将来自胸腔积液的原始FL细胞和FL-SJC细胞分别离心,并通过流式细胞仪检测其免疫表型;4.靶向测序;5.将FL-SJC细胞接种到雌性SCID小鼠腋下用于建立异种移植模型;6.通过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术检测FL-SJC细胞系是否存在EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染,并设立阳性、阴性对照;7.使用CCK8试剂盒来评估FL-SJC细胞系的化学敏感性,同时与另外两个滤泡细胞淋巴瘤细胞系比较;8.通过定量RT-PCR技术和WB(Western Blot)技术检测FL-SJC细胞MLL2的表达。研究结果:FL-SJC细胞呈稳定增殖,倍增时间为24小时。瑞氏(Wright-Giemsa)染色表明该细胞与原始细胞形态相似,核质比较高。流式分析显示FL-SJC细胞表现出复杂的免疫表型:CD19++,CD20+,CD22++,HLA-DR+,CD10+,CD38+,Lambda+,CD23+,CD5+/-,和Kappa-。染色体核型分析提示FL-SJC细胞同时存在t(8;22)(q24;q11)和t(14;18)(q32;q21),以及涉及染色体2和3的其他异常。FISH分析显示FL-SJC细胞具有IGH/BCL2融合基因以及MYC重排。此外,特定基因靶向测序结果提示FL-SJC细胞存在KMT2D/MLL2和CREBBP基因突变。重要的是,皮下接种FL-SJC细胞的SCID小鼠均在6-8周内长出了实体肿瘤块。普通PCR结果证明FL-SJC细胞系不含EB病毒感染。药物实验表明其具有耐药性。定量RT-PCR结果显示,FL-SJC以及其他两个滤泡性淋巴瘤细胞系(Dohh2和SC1)中MLL2的mRNA表达与正常对照相比无明显统计学差异。WB结果显示与正常对照细胞相比,FL-SJC细胞中MLL2的蛋白表达降低。研究结论:在本研究中我们建立了一种新型MYC/BCL2双打击滤泡性淋巴瘤细胞系,并将其命名为FL-SJC细胞系。它可以作为MYC/BCL2 DH FL的基础研究以及药物开发的潜在工具。