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转基因技术是上世纪80年代发展起来的一项生物技术,在此基础上,人们开始制备带有优良性状的转基因动物,将转基因动物应用到畜牧业、医药产业、生命科学、食品科学等领域中去,使转基因动物的研究蓬勃发展,展现出良好的应用前景,受到人们的广泛关注。近二十年来,转基因动物研究发展迅速,获得了多种转基因动物,但在畜牧生产中,转基因家畜要达到商业化育种还有很多问题亟待解决,例如,转基因动物抗病力低、死亡率高、生产性能低下等,这不仅严重影响了转基因动物的健康,对人类健康、社会稳定和环境安全也存在着潜在的威胁。为了研究外源基因导入对宿主免疫功能的影响,我们选择F1代转Myo G和Myf6基因小鼠为研究对象,通过RT-PCR、MTT和ANAE等方法,研究外源基因整合对宿主脾脏的细胞免疫和体液免疫及相关细胞因子mRNA表达水平的影响,进一步推动了转基因技术在遗传育种上的应用。本文研究主要内容如下:1)提取了F1代转基因小鼠的基因组,采用普通PCR方法对小鼠DNA进行鉴定,筛选具有外源基因的小鼠作为后续研究对象。结果显示,共获得6只转牛Myo G基因小鼠和7只转牛Myf6基因小鼠。2)采用绝对荧光定量PCR法检测了F1代小鼠的拷贝数。结果显示,转Myo G基因小鼠大多为6-7个拷贝,转牛Myf6基因小鼠则是1-2个拷贝。3)检测了转基因小鼠的脾脏指数、淋巴细胞增殖能力、T淋巴数量与淋巴细胞凋亡率。结果显示:转基因小鼠在脾脏指数、淋巴细胞增殖能力均显著下降;T淋巴细胞数量在转牛Myf6基因小鼠中均极显著降低(P<0.01),在转牛Myo G基因中小鼠中也下降了,但个别差异不显著;淋巴细胞凋亡凋亡率极显著升高(P<0.01),表明转基因小鼠的免疫功能受抑制。4)通过荧光定量PCR检测转基因小鼠的脾脏IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6及TNF-a mRNA表达情况。结果显示,转牛Myo G和转牛Myf6基因小鼠脾脏中IL-2和IFN-γm RNA的表达下降,证明外源基因插入抑制了宿主脾脏的细胞免疫功能;转Myf6小鼠IL-4的表达显著降低,而转牛Myo G基因小鼠的降低不明显,证明外源基因的插入会抑制小鼠的体液免疫;部分转牛Myo G和Myf6基因小鼠中IL-6和TNF-a表达上调,提示外源基因的插入使机体免疫力下降并且发生了炎症反应。5)比较两种转牛基因小鼠的外源基因拷贝数与机体免疫力之间的关系,发现转牛Myo G小鼠的外源基因拷贝数明显多于转牛Myf6小鼠,但是转牛Myo G小鼠的脾脏指数、T和B淋巴细胞增殖能力及T淋巴细胞数量却都明显高于转牛Myf6小鼠,证明外源基因拷贝数不是造成我们的转Myo G和Myf6基因小鼠免疫力下降的主要原因。