【摘 要】
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目的:（1）检测miR-433在35对配对结直肠癌与正常粘膜上皮组织及9株结直肠癌细胞系中的表达。（2）检测过表达和敲低miR-433对结直肠癌细胞株增殖、克隆形成、皮下成瘤、迁移、侵袭及转移等生物学行为的影响。（3）探讨miR-433在结直肠癌进展过程中的具体作用靶点。（4）研究miR-433上游的调控机制。（5）研究miR-433对下游细胞周期和细胞上皮间充质转化的影响。方法:（1）qRT-P
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目的:（1）检测miR-433在35对配对结直肠癌与正常粘膜上皮组织及9株结直肠癌细胞系中的表达。（2）检测过表达和敲低miR-433对结直肠癌细胞株增殖、克隆形成、皮下成瘤、迁移、侵袭及转移等生物学行为的影响。（3）探讨miR-433在结直肠癌进展过程中的具体作用靶点。（4）研究miR-433上游的调控机制。（5）研究miR-433对下游细胞周期和细胞上皮间充质转化的影响。方法:（1）qRT-PCR检测miR-433在35对配对结直肠癌与正常粘膜上皮组织及9株结直肠癌细胞系中的表达水平;应用miRWalk数据库分析miR-433在结直肠癌中的作用通路;应用LinkedOmics数据库绘制生存曲线。（2）采用MTT、平板克隆、transwell、皮下成瘤及脾被膜注射肝转移模型检测干预miR-433表达对结直肠癌细胞系的影响。（3）应用TargetScan、microRNA.org、miRDB等数据库分析miR-433可能的作用靶基因,采用Western Blotting及双荧光素酶报告基因验证miR-433与靶基因的靶向作用。（4）应用UCSC、LASAGNA、DBTSS、JASPAR、CONSITE等生物信息学工具综合分析miR-433上游潜在的作用转录因子;采用ChIP及双荧光素酶报告基因系统验证其与miR-433启动子的靶向作用。（5）采用Western Blotting分析过表达miR-433后细胞周期及上皮间充质分子标记的变化。结果:（1）miR-433在结直肠癌组织中的表达显著低于配对正常粘膜组织;miR-433在结直肠癌中与Wnt、Ras、MAPK、cAMP信号通路及细胞粘附分子密切相关;miR-433可以在结直肠癌患者预后评估中作为潜在的保护因素。（2）过表达或抑制miR-433显著抑制或增强了结直肠癌细胞株增殖、克隆形成、迁移、侵袭、皮下成瘤及转移能力。（3）结合生物信息学工具、Western Blotting及双荧光素酶报告基因实验证实了miR-433靶向于CREB1、CCAR1及JNK1。（4）应用生物信息学工具、ChIP及双荧光素酶报告基因实验证实CREB1可以与miR-433上游启动子序列结合。（5）过表达miR-433抑制了phospho-Smad2、phospho-c-Jun、CDK2、snail、slug等的表达,同时上调了E-cadherin、β-catenin、p21及p27的表达。结论:（1）miR-433在结直肠癌组织中低表达,且可以在结直肠癌预后中起到潜在保护作用。（2）过表达或抑制miR-433显著抑制或增强结直肠癌细胞株增殖、克隆形成、迁移、侵袭、皮下成瘤及转移能力。（3）miR-433在结直肠癌组织中靶向于CREB1、CCAR1及JNK1,同时CREB1可以通过结合于miR-433启动子区域激活其转录,进而形成了CREB1/miR-433的反馈环路。（4）miR-433阻滞了结直肠癌细胞周期转换及上皮间充质转化。
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