少阳生骨方对SD大鼠软骨细胞体外培养增殖及Ⅱ型胶原表达影响的研究

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目的:通过对比观察少阳生骨方及盐酸氨基葡萄糖胶囊含药血清对大鼠体外关节软骨细胞增殖、II型胶原蛋白达的影响,探讨少阳生骨方保护损伤关节软骨细胞的效应。方法:1.大鼠关节软骨细胞体外培养体系的建立与鉴定:原代细胞应用联合酶消化法从1周龄SD大鼠关节软骨获取,并以倒置显微镜下观察形态学表现及甲苯胺蓝染色进行鉴定;2. MTT比色法观察少阳生骨方及盐酸氨基葡萄糖胶囊含药血清对大鼠关节软骨细胞在体外培养增殖的影响;3.免疫组化法观察少阳生骨方及盐酸氨基葡萄胶囊含药血清对大鼠体外关节软骨细胞II型胶原表达的影响。结果:1.采用联合酶消化方法建立大鼠软骨细胞体外培养体系,经倒置显微镜下形态学观察及甲苯胺蓝染色鉴定,确认分离培养的细胞符合软骨细胞的生物学特征、形态学、组织化学染色显示软骨细胞培养传3代以内可以保持表型的稳定。2.对软骨细胞增殖的观察显示:少阳生骨方(SYSGF)5%、10%、20%含药浓度的血清均能促进体外正常软骨细胞增殖,但增殖的效应不随浓度的递增而增加,以10%的含药血清浓度促进正常培养关节软骨细胞增殖最为明显,且在48时促进增殖作用最佳。在第48h时,对于正常培养的软骨细胞,10%SYSGF含药血清组与10%空白血清组比较有显著差异(P<0.05),与10%盐酸氨基葡萄糖胶囊含药血清组比较有统计学差异(P<0.05),其增殖作用不及氨基葡萄糖胶囊;各组细胞的增殖效应在第24h时较弱,第48时均强于第72h时。3.免疫组织化学结果显示:各组标本均可见II型胶原阳性表达,表达部位为胞浆,可见红棕色颗粒或成片状。SYSGF组较空白组的II型胶原表达强(P<O.05);少阳生骨方组与盐酸氨基葡萄胶囊的II型胶原表达相比较有差异(P<O.05。结论:少阳生骨方对正常关节软骨细胞均有良好促进增殖的作用,可促进正常关节软骨细胞合成分泌II型胶原蛋白;提示少阳生骨方对关节软骨具有保护作用,这是该方防治骨性关节炎的机制之一。
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