论文部分内容阅读
为了满足人们对抗癌药物喜树碱的需求,本文研究了外源营养元素对一年生喜树幼苗喜树碱含量的影响,一年生幼苗中喜树碱含量的动态变化以及幼苗中喜树碱的提取纯化工艺,结果如下：通过对喜树碱含量测定方法的研究,得到以下结论：1、建立了RP-HPLC法分析条件：色谱柱为phenomenex Luna C18(2)色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(30：70)；流速1ml/min;检测波长254 nm；柱温40℃；进样量20μL。该色谱条件下,喜树碱保留时间适中,峰形良好,与杂质分离较好。2、供试品溶液的制备方法如下：取喜树样品粉末约1.0g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量。于50℃超声提取1h,冷却至室温,称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,0.45μm滤膜过滤,续滤液作为供试品溶液。通过对一年生喜树幼苗生物量变化及喜树碱积累的研究,得到以下结论：1、一年生喜树幼苗在7-10月生长较快,叶、茎、根的干物质量迅速增加。不同月份喜树叶中喜树碱含量成一条单峰曲线,以8月中旬叶中含量最高。不同月份喜树茎和根中喜树碱含量类似成一条正弦曲线,喜树碱含量的极大值在8月中旬,极小值在10月中旬。2、在6-11月期间,喜树幼苗整株及根、茎的喜树碱总量持续增加。叶中喜树碱总量成一条单峰曲线,以10月中旬叶中喜树碱总量最高。喜树整株和叶中喜树碱总量在7-10月增长较快,茎中喜树碱总量在7-11月增长较快。通过对外源营养元素对喜树幼苗生长及喜树碱积累影响的研究,得到以下结论：1、氮元素对喜树幼苗生长及喜树碱积累的影响：1)氮元素能促进喜树幼苗的生长,但当施氮量大于0.95g/株时,茎和根的生物量增加不显著,仅喜树叶片显著增加。不同施氮水平下,喜树幼苗各器官喜树碱含量成一条单峰曲线,各器官中喜树碱含量在施氮量为1.90g/株时最高。2)随着施氮量的增加,喜树幼苗整株及叶、茎的喜树碱总量持续增加,增速在0-1.90g/株时最快。当施氮量大于1.90g/株时,喜树整株及叶、茎的喜树碱总量增幅不大。2、磷元素对喜树幼苗生长及喜树碱积累的影响1)磷元素能显著促进喜树幼苗的生长。不同施磷水平下,喜树幼苗各器官喜树碱含量成一条单峰曲线,各器官中喜树碱含量在施磷量为0.14g/株时最高。2)随着施磷量的增加,喜树幼苗整株及叶、茎的喜树碱总量持续增加,增速在0～0.28g/株时较快。当磷素施用量继续增加到0.56g/株时,喜树整株及叶、茎的喜树碱总量增加不明显,而根中喜树碱总量则小幅下降。3、钾元素对喜树幼苗生长及喜树碱积累的影响1)低用量的钾元素既可以促进喜树幼苗生长,也能提高喜树各器官的喜树碱含量。但当钾用量大于1.06g/株时,喜树幼苗生长会受到抑制,并且叶和茎中喜树碱含量会下降。2)当钾用量在1.06g/株时,整株喜树幼苗及叶、茎的喜树碱总量最高。通过对喜树幼苗的喜树碱提取纯化研究,得到以下结论：1、碱法提取喜树碱的最佳提取条件为：NaOH溶液浓度1%,NaOH溶液用量10ml/g原料·次,提取时间2h,提取温度为室温,提取次数3次。2、喜树碱纯化工艺为：提取液用盐酸中和至PH约为7左右,静置10小时后过滤,滤液上大孔吸附树脂,氯仿洗脱,氯仿液上硅胶层析柱,甲醇/氯仿混合液(v/v=2：98)洗脱,TLC检验,收集含有喜树碱的洗脱液,70℃减压浓缩得粗结晶,甲醇/氯仿(v/v=1：1)混合液重结晶,得喜树碱成品。喜树碱成品为淡黄色针状结晶,HPLC检测喜树碱含量大于99%。