低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光对小鼠皮肤屏障、胶原蛋白和部分光老化信号通道影响的研究

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第一部分低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光对小鼠皮肤屏障和胶原蛋白的作用研究目的:探讨低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光对小鼠背部皮肤的非剥脱性嫩肤作用,研究其对小鼠背部皮肤弹性、水分、角质层等皮肤屏障功能的影响。方法:BALB/c小鼠40只,随机分为4组,每个时间点10只。每只BALB/c小鼠背部皮肤用剪刀和脱毛膏脱去毛发,脱毛后24小时将背部平均分为4个区域:分别为0、1、1.5和2 J/cm2能量治疗区域,其中0J/cm2能量治疗区域为对照组。激光照射其他参数:脉宽5ns,光斑6mm,光斑有10%重叠。激光照射前对小鼠进行水合氯醛(1 mL/kg)腹腔注射麻醉,每周照射2次,共照射4周,末次照射后即刻(0天)、7天、14天、21天和28天分别进行相关检测,共5个时间点,其中0天组进行多探头皮肤测试系统检测透皮水分丢失(TEWL)皮肤弹性及皮肤水分后,继续存活,分别至7、14、21和28天时处死小鼠进行后续检测,结果:①皮肤弹性检测结果:激光治疗后即刻皮肤弹性明显下降(p<0.05),在7天后恢复,从21天开始至28天皮肤弹性明显增强(p<0.05)。②皮肤含水量检测结果:2J/cm2能量组在激光治疗结束后即刻检查时其含水量比对照组上升(p<0.05),但在第7天恢复正常,21天后在1.5 J/cm2和2 J/cm2治疗组含水量增加(p<0.05),到28天激光组比对照组均明显增加(p<0.05)。③羟脯氨酸含量检测结果:羟脯氨酸含量在21天后的1.5 J/cm2和2J/cm2治疗组中增加(p<0.05),持续至28天,1J/cm2,1.5J/cm2,2J/cm2,各治疗组的羟脯氨酸含量较对照组也有显著的增高(p<0.05)。④激光治疗后即刻TEWL值均明显增加,在治疗结束7天后趋向正常,但仍然明显高于对照(p<0.05),仅在2J/cm2的14天(p<0.05),从14天开始直至28天,TEWL值恢复正常,与对照没有明显差异(p>0.05)。⑤激光治疗后第7天角蛋白10(K-10)(2J/cm2,p=0.000)和中间丝相关蛋白Fillagrin (1J/cm2, p=0.000; 1.5,2J/cm2, p=0.000)均表达减少(p<0.05),但在21天后恢复正常,与对照组无明显差异(p>0.05)。结论:①低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光可促进小鼠背部皮肤的胶原蛋白增生,并可同时增加皮肤弹性和含水量,从而达到嫩肤作用;②在不同的能量强度中,1.5 J/cm2和2J/cm2强度组的效果较好。③低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光照射对皮肤屏障有轻微损伤,但能在短时间内迅速恢复。结论:①低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光可促进小鼠背部皮肤的胶原蛋白增生,并可同时增加皮肤弹性和含水量,从而达到嫩肤作用;②在不同的能量强度中,1.5 J/cm2和2J/cm2强度组的效果较好。③低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光照射对皮肤屏障有轻微损伤,但能在短时间内迅速恢复。第一i部分低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光对小鼠皮肤MMPs. TGFβ1/smad及NF-κB p65信号通路的作用研究目的:探讨低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光对小鼠皮肤MMPs表达的影响及其作用意义;并研究其与TGFβ1/smad和NF-κB p65信号通路的关系。方法:BALB/c小鼠40只,背部皮肤脱毛后,用中性红将小鼠背部皮肤均分为4个区域:分别为0、1、1.5和2J/cm2能量治疗区域,其中0 J/cm2能量治疗区域为对照组。激光照射其他参数:脉宽5ns,光斑6mm,光斑有10%重叠。激光照射前对小鼠进行水合氯醛(1 mL/kg)腹腔注射麻醉,每周照射2次,共照射4周,末次照射后7天、14天、21天和28天分别进行相关检测,共4个时间点,每个时间点10只。应用RT-QPCR技术检测各个时间点不同照射强度的小鼠皮肤组织中MMP1与MMP9的表达情况;应用Western Blot实验技术检测7d组与21d组的TGFβ1/smad、NF-κB p65信号通路蛋白表达情况。结果:①RT-QPCR结果显示:MMP1 mRNA在末次治疗14天后表达降低p<0.05),持续至21天,1J/cm2组(p>0.05),1.5 J/cm2组p<0.05)、2J/cm2组(p<0.05)。MMP9 mRNA在末次治疗14天和21天后表达明显减少(p<0.05),到28天MMP1与MMP9 mRNA的表达水平均恢复正常。② Western Blot结果显示:与对照组(0J/cm2)相比,激光治疗后第7天,TGFβRI的表达均有明显增多(p<0.05), smad2的磷酸化水平在1 J/cm2组未发现明显变化(p>0.05),而在1.5 J/cm2与2 J/cm2组有显著增高(p<0.05)。激光治疗后第21天,小鼠皮肤中TGFβRI的表达以及smad2的磷酸化水平均有明显增多(p<0.05)。③NF-κB p65的磷酸化水平在第7、21天未发现有显著差异(p>0.05)。结论:①低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光可引起小鼠背部皮肤组织中MMP1与MMP9的表达降低,进而引起胶原蛋白的表达增多。②低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光对小鼠背部皮肤非剥脱性嫩肤作用最佳激光强度在为1.5J/cm2和2 J/cm2组的效果较好。③低能量Q开关1064nm Nd:YAG激光对小鼠背部皮肤的非剥脱性嫩肤作用可能是通过启动TGFβ1/smad信号通路起作用,④未发现与NF-κB p65信号通路相关。
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