叠鞘石斛为兰科石斛属植物Dendrobium aurantiacum Rchb.var.denneanum(Kerr.)Z.H.Tsi.栽培品的新鲜干燥茎,具有益胃生津,滋阴清热等功效,用于阴伤津亏,口干烦渴等症。根据现有研究,叠鞘石斛中主要含有多糖类及联苄类成分,前者具有提高免疫、降血糖等药理作用,后者具有抑制肿瘤生长,抗氧化等药理作用。叠鞘石斛收载于《四川省中药材标准》(2010版)和《四川省中药饮片炮制规范》(2015版)中,为四川省道地药材,现已在四川实现规模化种植,是四川省石斛药材的主流品种之一。目前《药典》及各地方标准中大多未明确规定石斛的采收期。由于过去野生石斛资源较为稀缺,“全年均可采收”的描述适用于“随遇随采”野生零散植株的情况。现今多种石斛已实现规模化种植,为了保障药材质量和石斛药材种植的规模化,开展石斛采收期相关研究变得迫在眉睫;另外石斛类药材质柔韧纤维较多,传统初加工方式为切段,但随着切制技术的发展,切片成本减小、可操作性增强,切制方式有了新的选择,切片相较于切段在临床和日常的使用优势需要被验证。基于以上的目的,本文开展了叠鞘石斛适宜采收期的研究和切片切段的对比研究,具体内容如下:1.开展了叠鞘石斛多指标评价方法的研究(1)建立了多糖含量测定方法和相应的不确定度评定参考《中国药典》(2015版)铁皮石斛多糖含量测定方法,建立了以苯酚硫酸法为基础的叠鞘石斛多糖含量测定方法,并进行了方法学考察,表明该方法重复性好,稳定性强,准确度高,适合于叠鞘石斛多糖含量的测定。为了进一步提高方法的准确性,使用GUM法和MCM法对建立的测定方法进行了不确定度分析,经MCM法计算得到叠鞘石斛多糖含量测定结果的95%概率下包含区间为[15.28%,16.16%],多糖测定方法可靠准确。虽然GUM法未通过验证,但其对不确定度分量的描述仍有一定的参考价值。(2)联苄类总量测定方法在已有方法基础上进行了优化,并建立了石斛酚的含量测定方法。在本课题组已有方法的基础上,对联苄类总量测定方法进行了优化,改善了原方法的一些缺点,提高了方法的灵敏度与稳定性,进行了方法学考察,均符合要求表明该方法稳定准确;建立了联苄类石斛酚含量测定的方法,进行了方法学考察,均符合要求,表明该方法稳定准确。(3)从叠鞘石斛中分离并鉴定了顺式草木樨苷(cis-melilotoside),建立了顺式草木樨苷的含量测定方法。利用大孔吸附树脂柱层析等手段将顺式草木樨苷从叠鞘石斛中分离,并制成对照品,建立了相应的含量测定方法,经过方法学考察,均符合要求,表明方法稳定准确。(4)建立了叠鞘石斛HPLC指纹图谱方法建立叠鞘石斛HPLC指纹图谱方法,进行了方法学考察,均符合要求,表明该方法稳定准确。测定了11批次叠鞘石斛样品,结合主成分分析、聚类分析,热图等手段对不同采收期叠鞘石斛的宏观基础进行分析。(5)使用折干率、吸水率、浸出物等其他指标综合衡量叠鞘石斛的质量使用折干率衡量药材产量;吸水率衡量不同形态药材在水中浸泡的透心程度;使浸出物用衡量不同形态药材成分的溶出效率。2.利用建立的各指标测定方法,对不同采收期叠鞘石斛进行了测定,通过各指标综合分析以及熵权法结合TOPSIS法综合分析确定了叠鞘石斛的适宜采收期。利用建立各指标含量测定方法对11批次不同采收期的叠鞘石斛样品进行测定,测定结果指出折干率在每年的2月份较高,第二年春季的茎折干率最高。石斛酚含量随生长期增加而升高。多糖含量在第二年及以上的茎中春季较高,秋季较低。以联苄类及苷类的变化规律为基础,运用多种统计方法分析指纹图谱信息,以采收时间第一年11月和第三年7月为节点可将叠鞘石斛的生长划分为3个阶段。在第二年冬季至次年春初的叠鞘石斛茎(DQ8批次)中成分含量想对较高适宜采收。指纹图谱使用熵权法与TOPSIS法综合评价后得出结论相同。3.建立了模拟临床应用的煎煮模型和模拟日常茶饮的温浸模型,利用建立的各指标测定方法对叠鞘石斛切片与切段的优劣进行了对比研究。将叠鞘石斛燀蒸后切成10mm的段和4mm的片,分别模拟煎煮60 min、90min、120 min及温浸60 min、90 min下的情况,测定多糖溶出量、石斛酚溶出量、联苄类总量、吸水率、浸出物等指标。叠鞘石斛吸水率切片相较于切段平均多出1.46倍;水溶性浸出物切片比切段多出1.2倍,醇溶性浸出物切片比切段多出1.1倍;在模拟煎煮过程中切片相较切段多糖平均溶出率增长1.17倍,联苄类成分平均溶出率增长1.3倍,石斛酚溶出率增长2.5倍;在模拟温浸过程中切片相较切段多糖平均溶出率增长1.11倍,联苄类成分平均溶出率增长1.5倍,切片可以显著提高成分的溶出效果。表明叠鞘石斛切片优于切段。