论文部分内容阅读
背景:经过大量的全球多中心临床研究证明,表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKI)已奠定了其在表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变型非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者中的一线治疗地位。然而,大部分EGFR-TKI获益患者在治疗一段时间后会出现继发性耐药导致治疗失败。为突破这一临床治疗瓶颈,需要在不断阐明EGFR-TKI耐药机制的基础上找到更好的指导治疗方案的分子学标志物。相对于传统的肿瘤标志物及基因突变检测,肿瘤蛋白组学方法构建的差异多肽诊断模型,包含更全面的肿瘤生物学信息。磁珠辅助基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)是目前用于肿瘤蛋白组学分析的核心技术。本研究旨在使用MALDI-TOF仪器从肿瘤蛋白组学角度观察NSCLC患者接受EGFR-TKI治疗中的血清多肽变化,已期为目前的组织学、血液学基因学检测结果提供补充和新的视角。第一部分目的:本研究旨在应用基质辅助激光解析离子化-时间飞行质谱仪检测NSCLC患者在接受EGFR-TKI治疗过程中血清多肽的变化并探索其临床意义。方法:1.收集34例NSCLC患者使用EGFR-TKI治疗前、最佳疗效时及疾病进展后自身配对的血清样本102份;2.本研究每例患者采血3次,分别为:(1)入组口服TKI治疗前;(2)最佳疗效时:临床评价部分缓解(partial response,PR)或疾病稳定(stable disease,SD)时所留取的血液标本;(3)疾病进展后:临床评价疾病进展(progressive disease,PD)后所留取的血液标本;3.采用纳米磁珠提取血清中的多肽,之后经过MALDI-TOF-MS仪器检测,得到质谱的数据使用CPT统计软件分析得出多肽图谱;4.将所得的差异多肽峰分别与PFS、OS及EGFR突变情况进行相关性分析。结果:1.34例接受EGFR-TKI治疗的患者无完全缓解(complete response,CR)患者,部分缓解(partial response,PR)11例,疾病稳定(stable disease,SD)23例,中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)为8.0个月,中位总生存期OS为11.4个月;2.对TKI治疗的三个不同时间点的血清进行质谱检测,结果显示三个时间点多肽指纹图谱均不相同;3.配对分析最佳疗效时与基线时质谱数据经CPT软件共鉴定出差异多肽峰87个,筛选出两组间有统计学差异(P<0.001、AUC≥0.9)的多肽峰1个;疾病进展时与基线时共鉴定出差异多肽峰96个,筛选出两组间有统计学差异(P<0.001、AUC≥0.9)的多肽峰3个;最佳疗效时与疾病进展时共鉴定出差异多肽峰115个,筛选出两组间有统计学差异(P<0.001、AUC≥0.9)的多肽峰4个。结论:NSCLC患者在EGFR-TKI治疗过程中血清蛋白存在着动态变化,但鉴于本研究的病例数有限,初步鉴定出的差异多肽与治疗获益及疾病耐药的具体关系仍需在更大样本的基础上进行验证。第二部分目的:本部分通过使用MALDI-TOF质谱技术分析两组NSCLC患者接受EGFR-TKI治疗前后血清蛋白变化,旨在观察对于EGFR-TKI反应不同两组患者出现耐药后的血清多肽差异的不同。方法:收集49例晚期NSCLC患者EGFR-TKI治疗前后自身配对的血清样本98份,每名患者采血时间为EGFR-TKI治疗前即基线和疗效评价疾病进展后。统计所有患者PFS后计算出中位PFS,根据其长短将患者分为短PFS组与长PFS组。采用磁珠磁珠提取血清中的多肽,之后采用MALDI-TOF-MS仪器检测,得到质谱的数据使用CPT统计软件分析得出多肽图谱。结果:整体分析49例患者治疗前后组自身配对差异多肽,两组数据用统计学软件得出有统计学意义(p<0.01)的差异多肽峰16个。长PFS组的24例样本中,治疗前后组自身配对聚类分析得出两组数据交叉确认值94.44%,区别率95.45%均为最高。两组数据用统计学软件分析得出有统计学意义(p<0.01)的差异多肽峰20个。短PFS组的25例样本治疗前后组自身配对聚类分析得出两组数据交差验证值68.10%,识别率87.87%。后使用统计学软件未找到两组间有统计学意义的差异多肽峰。结论:本研究发现在EGFR-TKI治疗的长PFS组NSCLC患者中,治疗前后可鉴定出差异多肽,推测其与TKI耐药或疾病进展相关。而在短PFS组中,EGFR-TKI治疗前后未鉴定出差异多肽。但鉴于本研究的病例数有限,需要进一步扩大样本量对结果进行验证及深入分析。