[目的]:马拉色菌感染所致花斑癣的基本皮肤损害包括色素减退和/或色素沉着,皮肤色素改变除考虑个体差异性外,是否与不同菌种或菌株的生物学特性差异有关?本课题将①马拉色菌与角质形成细胞共同培养后的上清和②马拉色菌分别加入黑素细胞培养体系中,探讨马拉色菌对培养人黑素细胞酪氨酸酶活性、黑素含量及酪氨酸酶mRNA表达的影响。 [方法]:将人包皮表皮细胞悬液用MCDB153培养基添加佛波酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-14-acetate,TPA)、霍乱毒素(Cholera toxin,CT)、重组人表皮细胞生长因子(recombinan human epidermal growthfactor,rhEGF)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(Isobutyl methylxanthine,IBMX)等进行黑素细胞纯化培养。用多巴染色、Fontana银染和S—100蛋白免疫组化染色法鉴定培养的黑素细胞。利用氧化反应原理建立酪氨酸酶活性检测体系。将7种马拉色菌分别与角质形成细胞株(HaCat)共同培养24小时后,获得共同培养上清液,按1∶1,1∶3,1∶7(上清体积∶黑素细胞培养液体积)加入黑素细胞培养体系中,24小时后观察黑素细胞增殖情况(MTT法)、测定酪氨酸酶活性(氧化多巴反应)、黑素含量(NaOH溶解法)、酪氨酸酶mRNA的表达(实时荧光定量PCR法)以及超微结构的变化。 [结果]:1.建立了黑素细胞纯化培养体系,能在体外培养及传代5次。