中药多糖提取方法及其免疫增强效果的初步研究

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中药中的多糖成分可以作为免疫增强剂或佐剂,用以提高动物机体的免疫功能,从而起到免疫增强的作用,近年来受到广泛的关注。本研究主要研制一种中药多糖,用于增强疫苗免疫效果,通过用不同提取方法考察玉竹、板蓝根、广藿香、紫锥菊四种中药材的多糖提取率,优化提取工艺,并研究玉竹、板蓝根多糖对鸡新城疫、鸡禽流感疫苗免疫效果的影响。具体研究方法和结果如下:选取玉竹、板蓝根、广藿香、紫锥菊四种中药材,分别用水浸提法、超声波法、酶解法进行多糖提取率的试验,结果表明,玉竹和板蓝根在超声波法下的提取率相对其它两种提取方法最高(P<0.05),分别达到40.35%和6.44%,而广藿香和紫锥菊使用上述三种提取方法进行提取,其提取率均不理想。同时,采用超声波法进行玉竹和板蓝根多糖提取的正交试验,优化提取工艺,结果表明,玉竹多糖的最佳提取工艺为料液比1:20,超声时间60 min,温度100℃,提取次数3次;板蓝根多糖的最佳提取工艺为料液比1:20,超声时间30 min,温度为90℃,提取次数2次。以雏鸡为实验动物,采用环磷酰胺进行免疫抑制,在免疫的同时加入玉竹多糖和板蓝根多糖作为免疫增强剂考察其对鸡新城疫疫苗免疫效果。将雏鸡随机分为6组进行免疫,分别为空白试验组、玉竹多糖组、板蓝根多糖组、环磷酰胺组、玉竹多糖加环磷酰胺组、板蓝根多糖加环磷酰胺组,于免疫前0 d,免疫后7、14、21、28、35 d进行抗体监测。结果表明,在免疫后35天,玉竹多糖在免疫抑制情况下对抗体滴度有显著提高(P<0.05),对血清Ig A抗体、外周淋巴细胞转化率、免疫器官指数无显著差异(P>0.05)。以玉竹多糖和板蓝根多糖为佐剂对鸡禽流感疫苗进行免疫影响试验,分别设置空白对照组、疫苗对照组、玉竹多糖佐剂组和板蓝根多糖佐剂组进行免疫,于免疫前0 d,免疫后7、14、21、28和35 d采血分离血清,分别对D7抗原和r D8抗原进行HI检测。结果显示,玉竹多糖佐剂组和板蓝根多糖佐剂组在免疫后21 d和免疫后28 d对D7抗原抗体滴度有显著提高(P<0.05),在免疫后21 d和免疫后35 d对r D8抗原抗体滴度有显著提高(P<0.05)。综上所述,玉竹多糖和板蓝根多糖提取最佳方法为超声波法,并采用正交试验,筛选出最佳提取工艺,玉竹多糖作为免疫增强剂可以增强鸡新城疫疫苗的免疫增强效果;玉竹多糖和板蓝根多糖作为疫苗佐剂可以显著提高禽流感疫苗抗体滴度水平。
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