海藻糖在龙须菜抗高温胁迫中的作用及植物激素对龙须菜繁殖发育的影响

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大型海藻龙须菜(Gracilariopsis lemaneiformis)在我国北方和南方海域均有栽培,主要用作琼胶提取原料和鲍的饵料。随着龙须菜栽培面积和产量的扩大,目前已成为我国第二大产量的栽培海藻。但是,南方海域龙须菜的栽培周期受到夏季高温天气的制约,严重影响了其产量与经济效益。此外,龙须菜的栽培依靠营养繁殖,而长期营养繁殖将导致其种质退化,因此对优良龙须菜种质的要求比较迫切。非还原性二糖海藻糖可作为一种信号分子在对抗高温、干旱等逆境胁迫中发挥重要作用。植物激素在高等植物的繁殖与发育过程中也表现出一定的作用。基于以上背景,本论文研究了海藻糖在龙须菜抗高温胁迫中的作用,以及植物激素在调控龙须菜果孢子放散与发育中的作用。主要结果有:(1)外源添加海藻糖对高温胁迫下龙须菜的生长、膜损伤相关物质、内源植物激素和代谢途径关键酶等的影响。结果表明,海藻糖增强了高温胁迫下藻体的光合作用,降低了藻体腐烂变白的比例,促进了龙须菜的生长(1.39倍),提高了总藻胆蛋白和脯氨酸含量(1.35倍)。同时,海藻糖缓解了高温对藻细胞膜的损伤,丙二醛含量和脂氧合酶活性分别降低了30.94%和17.28%(48 h,P<0.05)。海藻糖的添加激活了海藻糖代谢途径关键酶——海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS,2.91倍,24 h)和海藻糖酶活性(1.43倍,24 h),以及4条TPS基因的表达量。此外,海藻糖添加后显著促进了龙须菜中水杨酸(SA)和脱落酸(ABA)含量,以及水杨酸合成关键酶——异分支酸合酶及苯丙氨酸解氨酶活性升高。(2)利用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测海藻糖添加对龙须菜代谢物的影响。我们共检测出405个代谢物,其中66个为差异代谢物。在差异代谢物中,大多数氨基酸如缬氨酸、苏氨酸、半胱氨酸等含量均下降,氨基酸高效液相色谱检测法验证结果表明84.62%的氨基酸变化与代谢组结果一致。另外,多胺途径中的亚精胺、糖酵解中间产物3-磷酸甘油酸、葡萄糖-1-磷酸以及多种酚酸类物质在海藻糖添加后显著富集。(3)盐度条件和植物激素对龙须菜果孢子放散与发育的影响。结果表明盐度35培养藻体的果孢子放散量和直立枝发芽率分别为盐度25培养的29.28倍和1.40倍。100μmol/L SA的添加促进了龙须菜果孢子的放散(9.88倍)和直立枝发芽率(2.18倍)。0.25 mg/L赤霉素(GA3)可提高果孢子的放散量(8-20倍),但对盘状体萌发出直立枝的数量则无影响。0.5 mg/L萘乙酸(NAA)处理后,龙须菜幼苗的线生长速率和相对生长速率升高。综合以上结果,外源添加10 mmol/L海藻糖可以促进龙须菜生长、光合作用、藻胆蛋白含量、脯氨酸含量,降低膜损伤相关物质含量或活性,刺激超氧化物歧化酶、海藻糖代谢关键酶活性,并且促进抗逆相关激素的积累,从而来缓解高温胁迫对龙须菜带来的不利影响。植物激素在龙须菜的繁育过程中发挥了重要作用,其中100μmol/L SA可以促进龙须菜果孢子放散、直立枝的萌发;0.25 mg/L GA3和0.5 mg/L NAA参与了龙须菜果孢子放散和幼苗生长的调控过程。以上研究为利用海藻糖和植物激素提高龙须菜的抗高温性与繁育发育提供了理论基础。
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