【摘 要】
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肺炎克雷伯（Klebsiella Pneumoniae,K.pn）是肠杆菌科克雷伯菌属中的一种常见条件致病菌。它能引起人畜感染发病,并广泛存在于环境中,呈世界性分布。也是引起奶牛乳房炎重要的环境致病菌之一,由于治疗使用了大量的抗生素,使得肺炎克雷伯菌多重耐药株增多,其耐药性增强,给预防和治疗带来了巨大的困难。由于肺炎克雷伯菌致病感染的的关键是黏附,黏附素MrkD蛋白是决定其黏附的关键,如果阻断黏附
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肺炎克雷伯（Klebsiella Pneumoniae,K.pn）是肠杆菌科克雷伯菌属中的一种常见条件致病菌。它能引起人畜感染发病,并广泛存在于环境中,呈世界性分布。也是引起奶牛乳房炎重要的环境致病菌之一,由于治疗使用了大量的抗生素,使得肺炎克雷伯菌多重耐药株增多,其耐药性增强,给预防和治疗带来了巨大的困难。由于肺炎克雷伯菌致病感染的的关键是黏附,黏附素MrkD蛋白是决定其黏附的关键,如果阻断黏附,细菌就不能继续侵袭宿主细胞,因此针对其黏附进行研究,可以为进一步研究细菌黏附、乳房炎的防治以及亚单位疫苗打下基础。本研究对内蒙古呼和浩特市和巴彦淖尔市两个地区48份奶牛乳房炎乳样品进行了肺炎克雷伯菌分离培养,选取一株疑似株,首先利用形态学和生化试验对分离菌进行鉴定,然后利用PCR对肺炎克雷伯菌特异性基因khe和16Sr RNA基因鉴定以及测序比对,最终确定分离株为肺炎克雷伯菌,命名为KP3;以分离株KP3基因为模板扩增出MrkD基因,并与载体p Cold I连接成功,获得重组质粒p Cold I-MrkD,通过诱导表达得到了可溶性MrkD重组蛋白,优化了表达条件;利用Western Blot鉴定,结果表明MrkD重组蛋白具有较好的反应原性。随后利用间接免疫荧光检测肺炎克雷伯菌对奶牛乳腺上皮细胞的黏附,通过使用MrkD重组蛋白对奶牛乳腺上皮细胞作用以后,再利用K.pn对奶牛乳腺上皮细胞黏附,从而证明了重组蛋白可以显著降低K.pn对奶牛乳腺上皮细胞的黏附;并且重组蛋白血清与抗K.pn血清均能有效阻断K.pn的黏附。综上所述,本研究成功分离到了奶牛乳房炎源性肺炎克雷伯菌,命名KP3;通过原核表达,诱导表达得到可溶性MrkD重组蛋白,并鉴定了重组蛋白的反应原性;检测证明肺炎克雷伯菌可以对奶牛乳腺上皮细胞黏附,且证实了MrkD重组蛋白对K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞有显著影响,而制备的重组蛋白高免血清与抗K.pn血清均能有效抑制K.pn的黏附。为探究阻断细菌黏附以及防治肺炎克雷伯菌引起的奶牛乳房炎提供了技术储备。
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