长鞭红景天悬浮体系建立及反应器培养的研究

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长鞭红景天在中国传统医药领域有着举足轻重的地位,主要是因为其含有大量的有效次生代谢产物,如:红景天甙,罗塞维,酪醇等。但是随着需求量的增加,野生红景天资源正在快速的减少。因此,需要找到能够增加红景天次生代谢产物含量的方法。在本研究中,已成功通过长鞭红景天的叶子和茎段诱导出其多种愈伤体系,建立起其细胞颗粒悬浮培养体系。并在随后的研究中确定了该悬浮培养体系的生长限制性因子,最后研究如何了通过气升式生物反应器培养该悬浮体系。长鞭红景天叶子是最佳的诱导愈伤组织的外植体来源,且此愈伤体系最适合于建立细胞颗粒悬浮培养体系。最佳的愈伤组织诱导激素配方为:在MS基本培养基中添加3.0mg/L6-BA和0.1mg/L2,4-D,该激素配比也是建立悬浮体系的最佳培养基配方。通过研究该悬浮体系多组样品的干、鲜重变化动力学以及对应培养基中电导率、pH和蔗糖含量的变化,得到更换完培养基后细胞颗粒鲜、干重分别在39天和33天达到最大值(440.26和21.60 g/L),分别为初始鲜、干重的7.33和7.15倍。检测培养基中pH变化趋势得知,长鞭红景天细胞颗粒悬浮培养体系应处于微酸的培养基环境中,最适宜的pH应为5.0左右。通过设计不同成分组成的培养基培养细胞颗粒发现:蔗糖和大量元素为该悬浮培养体系生物量增加的限制性因素,其中蔗糖为主要的限制性因子。通过7L气升式生物反应器培养发现:细胞颗粒15g/L鲜重为最佳接种量,培养时间为15天,最终生物量为44.7g/L,为初始生物量的3倍。通过对比反应器培养和摇瓶培养得知,气升式反应器中过高的溶氧量是造成细胞颗粒培养时间短、生物量低的原因。
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