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目的:(1)了解胆汁对鼠伤寒沙门菌形成L型的影响,建立鼠伤寒沙门菌L型的检测方法。(2)了解猪胆囊携带鼠伤寒沙门菌L型的情况,探讨胆囊携带鼠伤寒沙门菌L型的检测方法。方法:(1)将鼠伤寒沙门菌接种于猪胆汁内,37℃需氧培养,分别于培养1h~60d不同时间段取诱导物进行常规细菌学分离培养与鉴定。(2)同时取诱导物经滤菌器滤过后接种于PG液进行细菌L型的非高渗分离培养,分离细菌L型的纯培养物。观察细菌L型的形态,培养特性,革兰染色,细胞壁染色,糖发酵试验和血清学反应。(3)用检测沙门菌属特异性基因inv A和鼠伤寒沙门菌特异性基因STM4495的二重PCR技术,对细菌L型进行检测,并将扩增产物进行测序分析。(4)在贵阳市某屠宰场,采集284份猪胆囊标本(胆囊组织142份和胆汁142份),采用常规细菌学方法进行鼠伤寒沙门菌的分离培养和鉴定。(5)同时采用非高渗分离培养方法进行细菌L型的分离培养,并用二重PCR检测细菌L型分离株的inv A和STM4495基因用于鼠伤寒沙门菌L型的鉴定。将部分PCR阳性产物片段进行测序分析。结果:(1)采用常规细菌学分离培养法从培养1h~60d的诱导物均可分离出细菌型,经鉴定为鼠伤寒沙门菌。(2)同时经非高渗分离培养检出细菌L型。细菌L型呈圆球形或卵圆形,在血培养基、麦康凯琼脂培养基和LEM平板上不能生长,革兰染色、细胞壁染色和血清学试验均呈阴性,而糖发酵试验结果无法判断。(3)二重PCR检测细菌L型inv A和STM4495基因可见与鼠伤寒沙门菌细菌型一致的284bp和915bp的扩增产物。将两者扩增产物序列经对比分析,发现其与Gene Bank数据库中公布的鼠伤寒沙门菌的一致性分别为100%和99%。(4)采用常规细菌学方法,从284份胆囊标本中,45份胆汁和104份胆囊组织检出细菌,阳性率为52.46%(149/284)。经革兰染色和生化鉴定,检出细菌17个种属、共200株,包括革兰阴性菌184株,革兰阳性菌16株。革兰阴性菌中检出率最高是大肠埃希菌(32.75%,93/284),其他还包括气单胞菌属、阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌、成团泛菌、弗劳地枸橼酸杆菌、迟钝爱德华菌、假单胞菌属、产碱杆菌属、沙门菌属、普通变形杆菌、巴斯德菌属、肺炎克雷伯菌、异型枸橼酸杆菌、产酸克雷伯菌。沙门菌经血清学鉴定为4株科特布斯沙门菌和4株伦敦沙门菌。革兰阳性菌均为链球菌属(5.63%,16/284),以牛链球菌(81.25%,13/16)为主,余下为温和链球菌。(5)采用非高渗分离培养法,90份胆汁和67份胆囊组织检出细菌L型,阳性率为55.28%(157/284)。经二重PCR检测,9份胆囊标本(3份胆汁和6份胆囊组织)检出沙门菌L型,阳性率3.17%(9/284),其中4份检出鼠伤寒沙门菌L型,5份检出其他沙门菌L型。在9份沙门菌L型阳性的标本中,5份胆囊标本(3份胆汁和2份胆囊组织)常规细菌学检测呈阴性,但非高渗分离培养检出2株鼠伤寒沙门L型和3株其他沙门L型。将部分inv A和STM4495基因PCR产物片段进行测序分析,发现与Gene Bank数据库中鼠伤寒沙门菌的一致性均为99%。结论:(1)鼠伤寒沙门菌在猪胆汁的作用下可发生细胞壁缺陷变异,成为L型;(2)常规细菌学方法不能用于鼠伤寒沙门菌稳定L型的分离培养与鉴定;(3)采用二重PCR技术检测inv A和STM4495基因,可鉴定鼠伤寒沙门菌的稳定L型;(4)经常规细菌学方法检测,发现猪胆囊可携带沙门菌和多种其他细菌,主要为革兰阴性细菌,以大肠埃希菌的检出率最高;(5)胆囊内的鼠伤寒沙门菌L型,可采用非高渗分离培养法进行分离培养;(6)猪胆囊可以携带鼠伤寒沙门L型,使宿主成为鼠伤寒沙门菌的潜在携带者。