目的:1.石柱参是参类药材的一种特殊品系,有着独特的生长环境及独特的历史文化,为参类药材之珍品。本文拟通过形态学鉴别知识,对石柱参品系进行研究,从宏观与微观等方面探讨石柱参与普通园参的不同特点,为石柱参与其它参类药材的鉴别提供科学参考,为石柱参的资源开发与利用提供资料。2.石柱参生长环境特殊、地理位置独特、生长年限久远,与普通园参除形态方面发生改变外,化学成分方面是否变化是本文研究和探讨的另一个方面。本文通过TLC和对9种人参皂苷的含量测定,寻找石柱参与其它参类药材的特征性成分,为石柱参质量标准的建立提供科学依据,为石柱参新的药效物质基础研究提供科学参考。3.建立石柱参HPLC指纹图谱,为鉴别药材真伪、判断药材质量的稳定性及市场商品的质量提供新的科学方法。材料与方法:1.材料:石柱参植物分类学上属于五加科(Araliaceae)人参属(Panax)植物人参Panax ginseng C.A.Mey.干燥的根及根茎。采自辽宁省丹东市宽甸满族自治县振江乡石柱子村,共采集样品21批(见表1-1)。园参药材为商品药材。2.方法:(1)植物形态分类方法。(2)传统形态鉴别方法。(3)组织形态学方法:应用冰冻切片机制备组织切片,并进行观察、描述及数码摄影。(4)TLC色谱分析方法。(5)高效液相色谱法测定9种人参皂苷的含量,并制定指纹图谱。结果:1.通过植物形态学和传统形态鉴别方法,进一步明确了石柱参的品系分类:石柱参属于野生山参类别,因其独特的生长环境和300年的栽培历史,使其外形酷似野山参,石柱参的品系可分为4种:(1)竹节芦;(2)线芦;(3)圆膀圆芦;(4)草庐。宏观分类研究为石柱参与其它参类药材的鉴别提供了科学参考。2.通过对不同生长年限、不同部位石柱参的组织形态学研究,发现了显微特征与生长年限的某些规律、与商品药材园参的显微特征的某些不同,同时对园参的显微特征有了新的发现和认识。(1)石柱参的组织形态学方面,随着石柱参生长年限的延长,其树脂道和草酸钙簇晶均呈现增多、增大趋势;木质部导管增多,由单个散在,变为逐渐聚集并排列成放射状。(2)商品石柱参与商品园参在组织形态上的区别主要体现在:树脂道直径大且多,草酸钙簇晶、淀粉粒众多,形成层特别明显而且连续,这与其生长年限长有关。(3)石柱参粉末观察结果:①树脂道直径大且碎片众多,棕色块多见,②草酸钙簇晶棱角尖锐,数量多且大;③木薄壁细胞具有斜向交错的纹理,且清晰明显;④淀粉粒多且大。(4)关于园参药材粉末特征的新认识:通过大量的实验观察,我们发现6年生以上的园参药材粉末,其木薄壁细胞也具有斜向交错的纹理,这与以往的研究报道不同。3.通过石柱参与园参大量的TLC色谱鉴别比较,选用硅胶G-CMC板薄层板,三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下层溶液作为展开剂,结果发现石柱参的薄层色谱在Rf=4.9位置增加一个斑点,为两者的鉴定提供了有价值参考。4.利用高效液相色谱法,对石柱参与园参中的9种人参皂苷(Rg1、Re、Rf、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd)进行的含量测定结果:其中人参皂苷Rb1含量较高,明显高于其他8种人参皂苷,其次是人参皂苷Rg1、Re、Rc的含量较高。9种人参皂苷中Rg2的含量较低。5.利用高效液相色谱法建立了石柱参药材的指纹图谱,共标定了14个共有峰,其中9个共有峰得到归属。由于S峰(人参皂苷Re)的分离度好,含量高,专属性强,比较稳定,故确定其为参照峰。采用国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版》软件,对图谱进行匹配,进行数据处理。14个共有峰的峰面积之和占总峰面积的90%以上,符合中药材指纹图谱技术要求。且谱峰特征明显清晰,实验结果证明,实验条件及方法准确、可行。通过石柱参药材指纹图谱能有效地控制石柱参的质量,为该药材的质量标准制定及石柱参的质量控制提供科学依据与参考。结论:1.石柱参也称林下石柱参,是源于野山参的珍稀人参品种,是参类药材的佳品,对石柱参品系的深入研究,并与商品园参的比较研究,对开发该参类品系具有非常重要的意义和研究价值。2.石柱参独特的生长环境及独特的历史文化,使其形态与众不同,本文通过形态学鉴别知识,对石柱参品系进行了观察比较。为石柱参与其它参类药材的鉴别提供科学参考,为石柱参的资源开发与利用提供资料。3.通过微观鉴定研究,寻找到了石柱参与园参粉末鉴定区别点,探寻出了石柱参不同生长年限及随生长年限的增长,组织构造的发生规律;同时对园参的显微特征有了新的认识,发现新的组织,对以往报道的园参粉末特征木薄壁细胞未见斜向交错纹理的观点提出商榷。4.首次采用薄层色谱法对石柱参药材进行研究,发现了薄层板上与园参不同的色谱斑点,有可能作为石柱参与园参的鉴别标志,但还需进行更深一步的研究,对该成分进行化学成分分析,药效学的研究等。5.首次测定了石柱参中9种人参皂苷的含量,并建立了同时测定9种人参皂苷含量的方法,该方法稳定可靠,简单易行,快速准确,可为石柱参的质量评价提供参考,同时也可用于参类药材各人参皂苷的定量分析。含量测定的结果显示,石柱参中人参皂苷含量随生长年限的增长而增长,15年生石柱参人参皂苷含量最高,商品药材石柱参优于园参,石柱参的最佳采收期为8月上旬。对石柱参的含量测定研究,为正确认识和使用石柱参药材提供了科学的参考依据。6.首次对石柱参药材进行了指纹图谱研究,确立了石柱参的指纹特征图谱,且图谱峰特征明显清晰。实验条件及方法准确、可行。通过石柱参药材指纹图谱能有效地控制石柱参的质量,为该药材的质量标准制定及石柱参质量的控制提供科学依据与参考。7.根据《辽宁药材编写细则》,首次制定了石柱参药材的质量标准草案。石柱参为辽宁道地名贵药材,不仅在国内市场上畅销,更远销海外,石柱参质量标准的制定可为该药材的应用与发展提供科学参考依据。