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迷迭香(Rosmarinus officinalis L.)是唇形科迷迭香属多年生芳香植物。迷迭香中具有多种天然活性成分,因具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性,可广泛应用于生物医药、化妆品、食品等领域。迷迭香成分的高效提取与不同品种提取物的功效探索是研究和利用其天然活性成分的重要环节。因此,本文以不同叶型(叶型分别为:短叶、宽叶、长叶)迷迭香的3个品种(分别为:R.officinalis‘Severn Sea’,R.officinalis‘Lockwood de Forest’,R.officinalis‘Albus’)为研究对象,先采用水蒸馏法制备精油,并对挥发性成分进行气质联用分析,然后对固体剩余物进行成分提取,优化溶剂(乙醇)回流提取、超声辅助提取、亚临界提取、超临界提取等四种提取方法,采用高分辨液质对不同叶型迷迭香的12种提取物进行非挥发性成分解析,探索抑菌、抗氧化及抗肿瘤等活性,为迷迭香活性成分的高值化利用提供科学依据。主要研究结果如下:(1)迷迭香挥发性成分解析。以R.officinalis‘Severn Sea’,R.officinalis‘Lockwood de Forest’,R.officinalis‘Albus’等3个品种为原料,采用水蒸馏法将挥发性成分制备为精油,利用GC-MS对精油中挥发性成分进行分析,发现三种迷迭香精油中分别有49、58、51种挥发性成分;不同品种迷迭香的挥发性成分的种类基本相同,但相对含量却存在较大差异,其中主要的共有成分为桉叶油醇(11.16~20.72%)、马鞭草烯酮(1.69~13.51%)、右旋龙脑(3.95~9.43%)、β-蒎烯(6.00~10.92%)、莰烯(5.38~8.21%)等物质。这些化学成分具有丰富的生理活性,因而可用于化工、食品、生物医药、化妆品等领域。(2)迷迭香成分提取条件优化。将迷迭香制备精油后的固体剩余物进行非挥发性成分的提取。通过单因素与正交实验相结合,优化了迷迭香成分的乙醇回流提取法、超声辅助提取法、亚临界提取法、超临界提取法的提取条件。结果表明,乙醇回流的最佳提取条件为:料液比1:25、提取时间1.5 h、温度80℃,三个品种的提取率分别是23.90%、23.77%、22.67%;超声辅助最佳提取条件为:提取时间50 min、料液比1:25、功率600 W,提取温度80℃,三个品种的提取率分别是23.11%、21.67%、21.48%;亚临界的最佳提取条件为:料液比1:20、提取温度60℃、提取时间30 min,三个品种的提取率分别是7.34%、7.14%、7.01%;超临界的最佳提取条件为:萃取压力400 bar、提取温度30℃、提取时间3 h,三个品种的提取率分别是6.00%、5.28%、5.79%。提取率大小顺序为:乙醇回流提取>超声辅助提取>亚临界提取>超临界提取。(3)迷迭香提取前后的基团变化分析。通过以迷迭香粉末为对比材料,对12种迷迭香提取物进行红外光谱分析,发现迷迭香中所含物质主要分别是多糖类、蛋白质、脂类、黄酮类等。提取前后基团组成相同,表明12种迷迭香提取物被有效提取。(4)迷迭香提取物非挥发性成分解析。采用高分辨液质对非挥发性成分进行分析。12种迷迭香提取物中含有丰富的活性成分,其中萜类、黄酮类、糖类等化合物相对含量较高,提取出来的物质主要有鼠尾草酚(16.16~28.72%)、蔗糖(1.37~14.75%)、木犀草素(0.36~16.69%)、鼠尾草酸(1.70~7.80%)等。采用四种方法提取的3种叶型迷迭香中的活性成分存在较大差异。(5)迷迭香提取物抑菌活性分析。采用滤纸片法对12种迷迭香提取物抑菌特性进行评价分析。结果表明,迷迭香提取物对金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌有明显的抑制效果,而对大肠杆菌、沙门氏菌的抑制作用不显著。利用抑菌APC指数和最小杀菌浓度综合评价抑菌活性,就叶型而言,短叶迷迭香提取物的抑菌活性最强;就提取方法而言,超临界提取物的抑制效果最强,而乙醇回流提取物的抑制效果最弱。(6)迷迭香提取物抗氧化活性分析。通过对12种迷迭香提取物的铁离子还原力、清除DPPH、OH、ABTS自由基的能力测定,表明迷迭香提取物具有极强的抗氧化能力,并且与浓度呈正相关,在较高浓度下清除能力与Vc相媲美。当迷迭香提取物浓度为512μg/m L,对DPPH和ABTS的清除能力均已达到90%以上;对OH自由基而言,短叶和宽叶迷迭香提取物具有较强的抗氧化能力,其清除能力在18 mg/m L时可达到90%以上,而长叶迷迭香提取物抗氧化能力不理想,尤其是乙醇回流提取物,在20 mg/m L时清除能力仅有80%;12种提取物都表现出一定的还原能力,即在浓度为512μg/m L时,迷迭香提取物的吸光值均在0.5以下。(7)迷迭香提取物抗肿瘤活性分析。采用CCK-8法,在体外抗肿瘤实验中研究了12种迷迭香提取物对Hela(宫颈癌细胞)、Hep G2(肝癌细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)、SGC-7901细胞(人胃癌细胞)增殖的抑制作用,结果表明,迷迭香提取物具有较好的抗肿瘤活性。12种提取物对SCG-7901和MCF-7细胞具有极强的抑制作用,其细胞致死率均在93%以上;对于Hep G2细胞而言,11种提取物具有极强的抗肿瘤活性,其细胞致死率均在94%以上,而亚临界提取的宽叶迷迭香提取物(Lockwood de Forest)的抗肿瘤活性相对较差,其细胞致死率是80.7%;对于Hela细胞而言,溶剂(乙醇)回流提取、超声辅助提取、超临界提取等三种方法的提取物具有极强的抗肿瘤活性,其细胞致死率均在93%以上,亚临界提取次之。(8)TOPSIS法综合评价。采样TOPSIS法,对3个迷迭香品种的12种提取物的提取得率、抑菌活性、抗氧化能力、抗肿瘤活性进行综合评价,结果表明:超临界提取的短叶迷迭香(R.officinalis‘Severn Sea’)提取物具有较好的发展潜力。本论文为迷迭香成分解析、提取方法、生物活性解析提供了理论基础,为进一步深度开发和综合利用迷迭香资源提供了科学依据。