【摘 要】
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本文对酵母胞内维生素B1、B2和B6的初步提取与检测进行了研究。 经实验得出维生素B1提取方法为:在避光条件下,盐酸浓度0.1mol/L、提取温度121℃、破壁时间30min。维生素B1检
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本文对酵母胞内维生素B1、B2和B6的初步提取与检测进行了研究。 经实验得出维生素B1提取方法为:在避光条件下,盐酸浓度0.1mol/L、提取温度121℃、破壁时间30min。维生素B1检测手段:在维生素B1的最大特征吸收波长238nm下,用HPLC法测定提取液中维生素B1的含量,确定色谱条件为:λ=238nm,流动相为甲醇和水(V甲醇∶V水=30∶70),流速1.2mL/min,柱温35℃。在此条件下回收率为88%~92%。VB1的出峰时间约为35min,VB1的标准品在浓度1.0μg/mL~5.0μg/mL内其峰面积与浓度线性关系良好(R2=0.9979)。 维生素B2提取方法为:在避光条件下,盐酸浓度0.1mol/L、提取温度121℃、提取时间30min。迅速冷却后调pH至4.5。维生素B2检测手段的确定:通过对分光光度法、荧光光度法和高效液相色谱法三种维生素B2测定方法的研究和比较,确定了荧光光度法为酵母胞内维生素B2含量测定的适宜方法。测定条件为:激发波长458nm、发射波长525nm,用连二亚硫酸钠专一性地淬灭维生素B2荧光。 维生素B6提取方法确定为:在严格避光条件下,酵母胞内的维生素B6采用非机械破碎法中的菌体自溶进行提取。进行自溶时间、自溶剂用量、初始pH、自溶温度及加水量的单因素比较实验,在单因素实验基础上做正交实验。得到鲜酵母维生素B6的最佳提取条件为:自溶48h,NaCl添加量3%,初始pH自然、自溶温度50℃及加水量250%。维生素B6用微生物法进行测定。标准维生素B6浓度在0.1ng/mL~0.5 ng/mL之间时,菌体吸光度与VB6浓度之间线性关系良好(R2=0.9898)。
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