【摘 要】
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为了提高人尿激酶原(pro-UC) cDNA在大肠杆菌中的表达水平,研究人员限制性内切 酶中的表达水平,研究人员用限制性内切酶将人尿激酶原cDNA酶切片一系列基因片段,并分别在大肠
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为了提高人尿激酶原(pro-UC) cDNA在大肠杆菌中的表达水平,研究人员限制性内切 酶中的表达水平,研究人员用限制性内切酶将人尿激酶原cDNA酶切片一系列基因片段,并分别在大肠杆菌中表达.发现其中一个富含大肠杆菌稀有密码子AGG(精氨酸)的片段表达量低 ,成为人尿激酶原cDNA在E.coli中高效表达的限制因素.将富含AGG(精氨酸)的片段在E.coli BL21-CodonPlus-RIL在表达,通过该菌株引入dnaY基因(即tRNA<,agg/aga(Arg))使该片段的表达量提高了10倍.最后用同样的方法提高全长人尿激酶原cDNA在大肠杆菌中的表达量,使其表达量达到全菌蛋白的5﹪,同时,通过定点空变的方法将其中的一个连续的密 码子AGG(AGGAGG)同义突变成大肠杆菌偏爱密码子CGT,并分别在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)和E.coli BL21-CodonPlus-RIL中表达含该突变序列的片段,发现在两种宿主菌中表达量相似.
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