目的：葫芦素E（cucurbitacin E，CuE）是从葫芦科属植物中分离得到的四环三萜类天然化合物，具有广泛的生物学活性,包括抗炎和抗肿瘤作用。近年的研究发现，葫芦素类化合物具有改变多种肿瘤细胞形态，破坏细胞骨架，使细胞周期发生阻滞的作用,从而发挥抗肿瘤作用。但其抗炎机制尚没有完全阐明。本研究以CuE为主，分析其对脂多糖（LPS）激活的小鼠巨噬细胞RAW264.7表达的肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-1（IL-1）等炎症反应的影响，以及对MAPKs信号通路、NF-κB信号通路蛋白活化和NF-κB的核转位的作用，在细胞和分子水平探讨其抗炎机制。方法1.小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞置于含体积10%胎牛血清的DMEM培养液中，在37C、5%CO2的恒温培养箱中培养。2.配置不同浓度的CuE（0.16mol/L、4mol/L、20mol/L、100mol/L）处理RAW264.7细胞48小时，用MTS方法检测CuE对细胞存活的影响，用吸光度为490nm的酶标仪检测吸光率，从而计算细胞存活率和半数抑制率(IC50)，根据结果选择合适药物浓度。3.不同浓度的CuE处理LPS活化的RAW264.7细胞12小时后，用相差显微镜观察细胞形态的变化，拍照记录。采用免疫印迹方法和蛋白定量方法检测G-actin和F-actin的表达量，通过细胞免疫荧光染色方法检测细胞内-actin的分布。4.碘化丙锭（PI）染色法检测LPS活化的RAW264.7细胞与不同浓度的CuE共同孵育24小时后的细胞周期变化。5.用细胞因子染色法结合流式细胞仪检测，分析CuE对LPS活化的RAW264.7表达细胞因子TNF-α和IL-1的影响。6.用免疫印迹法检测MAPKs信号通路磷酸化蛋白(p-p38、p-JNK、p-ERK1/2)和NF-κB信号通路蛋白（p-IκB、p-p65、IκB、p65）的水平，以及NF-κB的核转位的情况。结果：1.不同浓度的CuE处理RAW264.7细胞48小时后，细胞增殖随着CuE浓度的增加而减少，当CuE浓度达到100mol/L时，细胞存活率只有16.540.70%。提示CuE对RAW264.7细胞具有生长抑制作用，计算得到CuE的IC50为7.79mol/L，为进一步实验药物浓度的选择提供了依据。2．细胞形态观察表明，LPS刺激RAW264.7细胞与对照组相比，细胞体积变大，伪足伸长；加CuE后细胞变圆，伪足消失。3.免疫印迹结果显示，G-actin的蛋白含量随着CuE的加入而减少，而在F-actin量则增多；免疫荧光显示actin蛋白在细胞内由弥散分布变为聚集分布。4. PI染色显示，不同浓度的CuE作用LPS刺激活化的RAW264.7细胞24小时后，细胞周期大部分阻滞于G2/M期。5.细胞因子染色显示，不同浓度的CuE作用LPS活化的RAW264.7细胞6小时后，细胞因子TNF-α、IL-1的表达量呈剂量依赖性抑制。6.核质分离实验显示，不同浓度的CuE培养LPS活化的RAW264.7细胞4小时后，NF-B蛋白核转位的量减少，并呈剂量依赖性。7.免疫印迹显示，不同浓度的CuE对LPS活化的RAW264.7细胞的MAPKs信号通路和NF-B信号通路蛋白并无太大的影响。结论：1. CuE能够剂量依赖性的抑制RAW264.7细胞增殖，改变细胞形态，使actin聚集，并使其细胞周期阻抑于G2/M期，这些可能是CuE起到抗炎作用的机制之一。2. CuE能够剂量依赖性抑制细胞因子TNF-α和IL-1的表达，以及NF-B蛋白的核转位，但对MAPKs信号通路和NF-B信号通路活化没有显著的影响，表明CuE可能是通过抑制LPS活化的RAW264.7细胞的NF-B核转位，导致细胞因子TNF-α和IL-1的表达量减少，从而表现出抗炎效应。