近年来,抑郁症的发病率越来越高。单胺氧化酶-A作为明确的抗抑郁作用靶标,通过对其抑制剂的筛选,有望开发出新的抑郁症治疗药物。目前常用的抗抑郁症药物托洛沙酮及吗氯贝胺均是通过传统活性成分筛选方法获得,但这些方法存在步骤繁琐、周期长、成本高等缺点,不能满足当前对抗抑郁活性成分高通量筛选的要求。因此,有必要在新的筛选策略指引下,开发出更加简单、准确、高通量的单胺氧化酶-A抑制剂筛选方法,以提高抗抑郁症新药的发现速度。相比于游离酶,固定化酶具有活性稳定、可重复利用的优势,而基于配体垂钓策略的磁珠固定化酶抑制剂筛选技术,因其能够完成对复杂体系活性配体的精准识别和高效分离,在天然产物活性成分筛选领域获得了广泛关注。本研究基于配体垂钓策略的固定化酶技术和快速分离分析的高效液相色谱-紫外-质谱技术相结合,构建新的单胺氧化酶-A抑制剂的高通量筛选方法,并将其用于天然产物中单胺氧化酶-A抑制剂的筛选和发现,以期进一步提高新型抗抑郁症药物的研发效率。具体研究内容如下:第一章,介绍了抑郁症及单胺氧化酶-A的研究进展,对目前单胺氧化酶-A抑制剂及其筛选方法做了详细的介绍;另外,对新型筛选方法及固定化酶技术的一些知识进行了综述;在此基础上阐述了本文的研究思路与创新之处。第二章,以具有氨基修饰的磁珠为载体,戊二醛为交联剂,通过共价交联的方式,实现了单胺氧化酶-A的固定化。对固定化过程中影响酶活性的关键因素进行了系统考察,通过对磁珠固定化单胺氧化酶-A反应器经过一系列理化性质的表征,表明制备的单胺氧化酶-A反应器具有较好的酶活性。同时,基于单胺氧化酶-A反应器的特性,结合HPLC-UV分析系统建立了单胺氧化酶-A活性测试的方法,结果表明其具备进一步应用的实力。第三章,基于单胺氧化酶-A反应器,在HPLC-UV单胺氧化酶-A活性测定方法的基础上,建立了适用于已知化合物的单胺氧化酶-A抑制剂筛选方法。方法学考察结果表明,其有效性、重复性及稳定性均符合应用要求;进一步将酶反应器应用到已知化合物的筛选中,并成功从中筛选到了具有单胺氧化酶-A抑制作用的黄酮和生物碱类成分。第四章,以配体垂钓筛选策略为指导,将单胺氧化酶-A反应器和HPLC-Q-TOF-MS/MS技术相结合,建立了天然产物中单胺氧化酶-A抑制剂的筛选方法,并将其应用到延胡索和黄连的筛选中,最终在延胡索中筛选出了七个具有单胺氧化酶-A抑制活性的化合物:四氢非洲防己碱、原阿片碱、药根碱、海罂粟碱、延胡索乙素、巴马汀、去氢延胡索素;在黄连中筛选出了六个具有单胺氧化酶-A抑制活性的化合物:非洲防己碱、表小檗碱、药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱。第五章,系统总结本文的研究工作,在此基础上对后续的研究工作进行了展望。