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背景目前，肺癌的发病率在世界范围内处于首位，其还是成为许多国家恶性肿瘤死亡的主要原因。临床上，通过影像学、支气管镜、CT引导下肺穿刺活检等技术来确诊肺癌，但在已诊断明确肺癌中75%中都是晚期或者转移。在西方国家，肺癌的5年生存率不到15%，在发展中国家如亚太地区、印度，5年生存率甚至不到9%。随着影像学、支气管镜和痰脱落细胞的技术成熟和先进，但肺癌患者的死亡率未能得到很大的降低和改善。需要更多的科研及临床工作者尽可能探寻早期筛检肺癌的灵敏和特异方法，积极探索肺癌早期的预警信号。近年来，筛选和挖掘肺癌的生物标志物已经成为热点研究领域。基因的功能发生可遗传、可逆性的改变，而基因的序列并未同时改变，此为表观遗传学。其表现形式主要是DNA甲基化，是恶性肿瘤发生发展过程中较常见的早期事件，可作为早期诊断肺癌的新型标记。抑制基因启动子区CpG岛的甲基化水平升高使其转录失活，使肿瘤发生。肺癌、胃癌、乳腺癌、结肠癌、肝癌、前列腺癌等恶性肿瘤都与启动子CpG位点甲基化有关。脆性组氨酸三联体基因(fragile histidinetriad gene，FHIT)、O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-Methylguanine-DNAmethyltransferase，MGMT)和Ras相关区域家族1A(Ras association domainfamily member-1，RASSF1A）基因启动子CpG岛甲基化已成为研究发生肺癌机制的主要方面，其有可能成为预测早期肺癌的重要生物标志。目的探讨外周血FHIT、MGMT和RASSF1A基因启动子甲基化与肺癌发生发展的关系。对象和方法1.收集郑州大学第一附属医院和胸科医院2012年10月至2013年3月期间收治的原发性肺癌患者137例，所有病例均已经病理学或细胞学确诊，且未经过手术和化疗的血液标本。还有收集138例肺良性患者标本，141例已排除全身各器官恶性肿瘤的同期健康体检人群。血标本的采集和流行病学资料的搜集均由医生在征得受试者知情同意后实施。2.检测基因的甲基化水平：对研究基因（FHIT、MGMT和RASSF1A）启动子序列的甲基化水平，采取实时荧光定量甲基化特异性PCR的方法来进行检测。3.数据分析、处理：采用SPSS12.0，采用中位数（M）和四分位间距（P25、P75）对不符合正态分布的连续性变量进行描述。采用2检验对定性资料进行数据分析，对于定量资料，若为偏态分布，则采用Mann-Whitney U检验对两独立样本之间的比较进行数据分析，采用Kruskal Wallis检验对多组独立样本之间的比较进行数据分析。分析肺癌与性别、年龄、吸烟、甲基化水平的危险相关性，采用多因素非条件logistic回归分析方法。分析FHIT、MGMT和RASSF1A基因甲基化水平对肺癌诊断的价值，可采用受试者操作特性（receiver operatingcharacteristics，ROC）曲线来进行，并以曲线下面积为判断基准，=0.05为检验水准（双侧）。结果1.肺癌组FHIT、MGMT和RASSF1A基因的甲基化水平均高于肺良性组和正常对照组，差异都具有统计学意义(P=0.000，P=0.000，P=0.001)；采用偏态分布的定量资料Mann-Whitney U检验或Kruskal Wallis检验分析年龄、性别、吸烟、病理组织类型、淋巴结转移和临床分期与FHIT、MGMT和RASSF1A基因启动子甲基化率的关联，差异无统计学意义(P>0.05)。2.按FHIT、MGMT和RASSF1A基因启动子甲基化水平的百分位数25%、50%、75%的分界点分别把肺癌组和对照组，肺癌组和肺良性各分为4层，采用非条件logistic回归分析，结果显示FHIT、MGMT和RASSF1A基因甲基化水平的增加，患肺癌的危险性增加。在肺癌组和正常组的多因素logistic回归分析模型中，FHIT、MGMT、RASSF1A随着其甲基化水平升高，患肺癌的危险性明显增加（P=0.000，P=0.000，P=0.024)，高年龄和吸烟可增加患肺癌的危险性(P=0.003，P=0.014)；在肺癌组和肺良性组的多因素logistic回归分析模型中，随着FHIT、MGMT甲基化水平升高，患肺癌的危险性增加(P=0.040，P=0.005)，而RASSF1A随其甲基化水平，患肺癌的危险性可能性很大(P=0.112)。3.检测单一指标及联合检测多个指标对肺癌的诊断价值的比较。结果显示联合3个指标的甲基化水平比单个指标检测对肺癌诊断价值高，单个指标检测中，对肺癌诊断价值大小依次为MGMT(AUC=0.781)、 FHIT(AUC=0.776)、RASSF1A(AUC=0.729)；ROC曲线评价检测单一及多个指标联合检测对I+II期肺癌的诊断价值的比较。结果显示联合3个指标的甲基化水平比单个指标检测对I+II期肺癌诊断价值高，单个指标检测中，对早期肺癌诊断价值大小为FHIT(AUC=0.797)、MGMT(AUC=0.783)、RASSF1A(AUC=0.725)。结论1.外周血FHIT、MGMT和RASSF1A基因启动子甲基化和肺癌有关；不同年龄、性别和吸烟史的患者FHIT、MGMT和RASSF1A基因启动子甲基化水平无明显差别，不同的病理类型、有无淋巴结转移以及不同的临床分期，相应基因的甲基化水平亦无差别。2.随着FHIT、MGMT和RASSF1A基因启动子甲基化水平增加，患肺癌的危险增加。3.联合检测FHIT、MGMT和RASSF1A基因启动子甲基化水平对肺癌的诊断价值高，因此采用荧光定量PCR对FHIT、MGMT和RASSF1A基因启动子甲基化率的检测有助于肺癌的诊断。