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本课题组前期利用慢病毒转基因技术,构建猪瘟病毒结构蛋白E2和口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的慢病毒表达载体,包装病毒颗粒,用慢病毒感染胚胎,制备得到转基因山羊,为基因工程疫苗的研究提供病毒的抗原蛋白。本研究利用PCR技术,从转基因胚胎移植后代中筛选转基因公羊。同时,为了快速扩繁转基因羊群体,使转基因山羊精液得到长期保存,充分发挥和提高优良转基因公羊的利用率,本研究对转基因公羊的精液品质进行分析,比较转基因公羊和普通公羊的精液品质,并通过进一步探究山羊精液的冷冻保存稀释液配方及其冷冻过程,摸索出一个更优化的冷冻保存方案。获得结果如下:1.转基因胚胎移植受体母羊生产后代后,选择公羊采集血液,并从血液中提取基因组DNA,进行PCR鉴定,PCR产物经胶回收后连接T载体进行测序验证;提取成年转基因公羊精液基因组,再次鉴定验证。结果显示,3只PCDH-BP5/11-OFMDV-VP1转基因羊和3只PCDH-BP5/11-CSFV-E2转基因羊的精液基因组中都整合有外源基因。2.转基因公羊与普通种公羊的精液品质,从射精量,精液密度,精子活率、质膜完整性、线粒体活性以及脂质氧化水平等各个检测指标相比较,均为差异性不显著(P>0.05),表明转基因公羊性能良好,可以作为种公羊进行扩繁。3.总结出一个更为优化的山羊精液冷冻稀释液配方,即冷冻稀释A液:Tris0.5mg/mL,葡萄糖52mg/mL,果糖52mg/mL,柠檬酸三钠3.5mg/mL,EDTA 0.7mg/mL,番茄红素1.0mg/mL,海带多糖1.0mg/mL,枸杞多糖2.0mg/mL,富含胆固醇的环糊精CLC 1.5mg/mL,庆大霉素0.3mg/mL,一般配制成100mL,在终体积的基础上加入15%的蛋黄。冷冻稀释B液:在A液的基础上加5%甘油。优化稀释液与普通稀释液相比较,冻存后精子的活率、质膜完整性、线粒体活性和脂质氧化水平等几个指标差异性显著(P<0.05);而转基因羊和普通公羊精液冻存后,其冷冻效率无差异(P>0.05)。本研究证明实验获得的转基因公山羊精子基因组中含有外源基因,同时利用优化的冷冻保存方案保存大量转基因羊精液,为后续扩繁转基因羊群体奠定了基础。利用优化的山羊精液冷冻保存方法制备的冻精,可进行人工授精,且与自然配种产羔率相近,说明优化的冷冻稀释液优良,可进行临床应用。