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目的：缺血性脑血管病是严重威胁我国居民生命和健康的主要疾病，具有致残率高、病死率高的特点。探讨脑血管病的病理生理学机制，寻找有效的治疗手段是当前医学界研究的热点和难点。脑缺血后继发性脑损伤是一个复杂的病理级联反应，其发病机制主要包括炎症反应、氧化应激、Ca2+超载、细胞凋亡等，其中炎症反应和氧化应激存在于脑梗死后的缺血和坏死区域，是导致脑缺血后继发性脑损伤的主要原因。因此，减轻炎症反应和氧化应激成为治疗脑缺血后继发性脑损伤的重要目的。Akt又称蛋白激酶B（Protein Kinase B），是糖原合成酶激酶-3β（glycogen synth asekinase，GSK-3β）的主要上游信号分子。研究证实，Akt/GSK-3β信号通路在生理和病理条件下对调节炎症因子和提高细胞存活起着核心作用。Akt激活后可通过磷酸化作用灭活凋亡效应分子如糖原合成酶激酶3（GSK3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9及BAD等从而促进细胞生存，可以提高脑组织抗缺血后脑损伤的能力。目前研究发现，GSK-3β调控促炎因子核因子κB（NF-κB）的活化，及NF-κB介导的趋化因子的表达。因此，抑制GSK-3β的活性可作为治疗缺血后继发性脑损伤的靶点。吴茱萸碱（Evodiamine，Evo）从芸香科植物吴茱萸的近成熟果实中提取的一种生物碱。具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、降血脂、降血压及抗疼痛等作用。有实验研究已经证实吴茱萸碱除了具有保护缺血再灌注心肌损伤并应用于治疗各种炎症性疾病如阿尔海茨默病、低氧引起的脑组织炎症等以外，还具有抗肿瘤的作用。但吴茱萸碱是否对脑缺血后的脑组织起到保护作用以及其作用机制如何均有待研究。本实验基于采用改良Longa线栓法成功建立小鼠大脑中动脉闭塞模型，分别观察：①应用吴茱萸碱后，观察其对脑梗死体积、脑含水量及神经功能缺损评分的影响，探索其脑保护作用；②应用吴茱萸碱后，测定缺血部位脑组织的phospho-Akt，phospho-GSK3β，NF-κB和claudin-5的含量变化，从而探讨其与脑保护作用的关系及其机制，为临床治疗提供更有利的理论依据。方法：实验分两部分：实验一，吴茱萸碱的脑保护作用研究；实验二，吴茱萸碱治疗组的phospho-Akt，phospho-GSK3β，NF-κB和claudin-5的含量变化。实验一：采用成年健康雄性ICR小鼠，随机分为假手术组（Sham）、单梗组（pMCAO）、溶剂对照组（Vehicle）、吴茱萸碱小剂量组（50mg/kg）（Evo-L）及吴茱萸碱大剂量组（100mg/kg）（Evo-H）。参照改良Longa线栓法制作小鼠右侧大脑中动脉闭塞模型（middle cerebral artery wasoccluded，MCAO）。术前灌胃三天，每日两次，术前30分钟灌胃一次，并于术后24h进行神经功能评分，然后将动物断头取脑，运用干湿重法测定脑含水量，采用2%2,3,5-三苯基四唑氮红（triphenyltetrazoliumchloride，TTC）染色测定脑梗死体积。实验二：采用成年健康雄性ICR小鼠，随机分为假手术组（Sham）、单梗组（pMCAO）、溶剂对照组（Vehicle）吴茱萸碱小剂量组（50mg/kg）（Evo-L）及吴茱萸碱大剂量组（100mg/kg）（Evo-H）。采用Western Blot方法测定phospho-Akt，phospho-GSK3β，NF-κB和claudin-5的表达情况,实时定量PCR方法测定NF-κB和claudin-5的表达情况。结果：1神经功能评分：pMCAO24小时后采用改良的6分法进行神经功能行为学评分。单梗组、溶剂对照组、吴茱萸碱高剂量组和吴茱萸碱低剂量组的小鼠均出现不同程度的左侧肢体偏瘫。但吴茱萸碱高剂量组（P <0.01）和吴茱萸碱低剂量组（P <0.05）与溶剂对照组相比神经功能缺损症状均有明显改善。2脑组织含水量测定：Sham组为78.68±0.59%，pMCAO组为84.5±0.76%，Vehicle组为84.25±0.57%。与其相比，吴茱萸碱治疗组脑组织含水量降低并具有统计学意义（Vehicle vs. Evo-L，84.25±0.29%vs.83.16±0.49%. p <0.05；Vehicle vs. Evo-H，84.25±0.29%vs.82.23±0.31%，p <0.01）。3脑梗死体积（%HLV）的测定：与Vehicle组（%HLV：43.9±2.61%）相比，吴茱萸碱治疗组明显降低了脑梗死体积（Evo-L%HLV：36.57±3.36%；Evo-H%HLV：32.78±3.78%），并且具有统计学差异（P <0.05）。4吴茱萸碱对phospho-Akt，phospho-GSK3β和NF-κB表达的影响：在蛋白水平，吴茱萸碱高剂量组和吴茱萸碱低剂量组与溶剂对照组相比phospho-Akt（P <0.01)，phospho-GSK3β（P <0.05）在蛋白水平表达均明显升高，NF-κB在细胞浆内升高（P <0.01）而在细胞核内积累降低（P<0.05）。在mRNA水平，吴茱萸碱高剂量组（P <0.05）与吴茱萸碱低剂量组（P <0.05）的NF-κB表达水平明显降低。5吴茱萸碱可以改善血脑屏障的通透性。脑缺血后claudin-5的表达明显下降。Western Blot及QRT-PCR均显示吴茱萸碱可上调缺血后脑组织内claudin-5的表达。结论：脑缺血后给予吴茱萸碱干预后，神经功能行为学评分改善，脑组织含水量减低，脑梗死体积减少；吴茱萸碱可以上调phospho-Akt、phospho-GSK3的表达水平，同时降低了NF-κB的表达和积累，对缺血后的脑组织有保护作用。吴茱萸碱也可上调claudin-5与改善血脑屏障有关。