背景:百草枯（paraquat PQ）是一种剧毒除草剂,能引起以急性肺损伤为代表的多脏器损害。临床中发现百草枯中毒患者血NT-pro BNP（氨基末端脑钠肽前体）可明显升高,其变化特点与原因尚不清楚,如果补充外源性BNP（重组人脑利钠肽,rh BNP）是否能对PQ中毒患者产生保护性影响尚不清楚。现阶段在临床已有关于补充rh BNP治疗脓毒症相关急性肺损伤的研究并取得一定成效,这为rh BNP治疗百草枯中毒急性肺损伤提供新的研究方向。TLR4/NF-κB信号通路是重要的炎症反应信号通路,可能参与到百草枯中毒急性肺损伤机制,但rh BNP是否参与TLR4/NF-κB信号通路调节有待研究。肺微血管内皮细胞损伤是百草枯中毒的重要基础之一,rh BNP对PQ染毒肺微血管内皮细胞的影响尚不清楚。目的:揭示百草枯中毒大鼠血BNP变化特点;通过生存实验探讨rh BNP早期治疗对百草枯中毒大鼠生存率的影响及合适的给药剂量;探索重组人脑利钠肽对PQ中毒急性肺损伤的保护作用,及是否基于影响TLR4/NF-κB信号通路及相关蛋白表达而发挥保护作用的机制;在细胞层面揭示rh BNP对PQ染毒肺微血管内皮细胞的增殖影响。方法:体内部分第一部分:采用百草枯诱导的SD大鼠为体内模型,大鼠分别随机分为两组:空白对照组（NC）、模型组（PQ组）。空白对照组给予生理盐水腹腔注射,PQ组予以腹腔注射百草枯20mg/kg,复制肺损伤模型。造模成功后连续观察,在12小时、24小时、3天、7天、14天的时间点,每组分别处死4只老鼠。收集大鼠血清和肺组织。血清行ELISA检测细胞因子BNP、IL-6的浓度,肺组织用于HE染色观察组织病理学改变和测量湿干重比。第二部分:采用百草枯诱导的SD大鼠为体内模型。大鼠分别随机分为四组:空白对照组（NC）、PQ+高剂量rh BNP组,PQ+中剂量rh BNP组,PQ+低剂量rh BNP组。空白对照组给予生理盐水腹腔注射,其余三组在予以腹腔注射百草枯30mg/kg1h后行腹腔注射不同剂量rh BNP（40ug/kg,20ug/kg,10ug/kg 0.5ml）,rh BNP每天1次连续给药7天。连续观察14天。记录大鼠死亡情况计算生存率并行死亡大鼠肺解剖检查。第三部分:采用百草枯诱导的SD大鼠为体内模型。大鼠分别随机分为四组:空白对照组（NC）、PQ组,PQ+rh BN组,PQ+地塞米松组。空白对照组给予生理盐水腹腔注射,PQ组予以腹腔注射百草枯20mg/kg,其余两组在予以腹腔注射百草枯20mg/kg后,分别1h后行腹腔注射rh BNP（20ug/kg）和地塞米松（25ug/kg）,每组按第1,3,7各时间分别处死大鼠,取血后行ELISA检测血清中IL-6和TNF-α浓度,取肺组织检测湿干比值（W/D）;Western-blot检测肺组织TLR4、NF-κB蛋白的表达和RT-RCR检测肺组织TLR4、NF-κB、TGF-β1 m RNA的表达。其余备行于检测肺组织SOD活力、MDA含量测定及HE染色观察病理情况,计算肺组织损伤病理积分。体外实验:以PQ染毒人肺微血管内皮细胞（HPMEC）为体外模型。将细胞分为4组,分别为正常对照组、PQ染毒组（PQ组）、PQ+重组人脑利钠肽治疗组（PQ+rh BNP组）、PQ+地塞米松治疗组（PQ+地米组）。用CCK-8法测定各组细胞增殖指数,ELISA测定细胞上清中IL-6、TNF-α的浓度水平,RT-PCR测定TLR4、NF-κB的m RNA水平结果:体内实验第一部分:PQ中毒大鼠在各时间节点上肺组织的湿干重比均大于对照组,且肺组织病理情况及评分较对照组严重。与对照组相比,PQ组大鼠血清中的细胞因子BNP（脑钠尿肽）、IL-6浓度均明显升高,BNP12小时即可观察到升高,且于第三天达到峰值;IL-6与BNP浓度具有显著的正相关关系。第二部分:通过生存分析发现,中剂量rh BNP（20ug/kg 0.5ml）可改善中毒大鼠生存率（P<0.05）,而高、低剂量组与对照组相比,生存率差异没有统计学意义。第三部分:1、HE染色结果显示,对照组:大鼠未见明显异常。PQ组:肺泡内可见炎症细胞浸润和扩张的毛细血管,肺泡结构破坏严重。PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组:大鼠的肺泡结构稍显完整,肺泡内充血和炎性细胞浸润的含量较PQ组也显著减少。与对照组相比,PQ组大鼠肺组织损伤评分上升。与PQ组相比,PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组大鼠肺组织损伤评分均偏低。2、W/D情况:与对照组相比,PQ组、PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组在各时间点大鼠肺W/D值显著高于对照组,而与PQ组相比,PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组大鼠肺W/D值均低于PQ组。3、ELISA结果:与对照组相比,各染毒组大鼠血清中TNF-α和IL-6浓度上升。与PQ组相比,PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组大鼠血清TNF-α和IL-6浓度均降低。4、MDA含量、SOD活力:与对照组相比,PQ组、PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组在染毒后肺组织中MDA含量上升、SOD活性降低。与PQ组相比较,PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组大鼠血清MDA含量均降低、SOD活性均升高。PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组相比无明显差异。5、RT-PCR结果:与对照组相比,PQ组、PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组大鼠肺组织中TLR4、NF-κB、TGF-β1 m RNA的表达水平明显增高。但与PQ组相比,PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组肺组织中TLR4、NF-κB、TGF-β1 m RNA表达显著降低。6、Western-blot结果:与对照组相比,PQ组、PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组大鼠肺组织中TLR4和NF-κB蛋白表达水平显增高。但与PQ组相比,PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组肺组织中TLR4和NF-κB蛋白表达显著降低,PQ+rh BNP组和PQ+地塞米松组两者无明显差异。体外实验1、与正常组比较,PQ组细胞增殖明显降低,而经过rh BNP干预后,PQ所致的细胞增殖明显改善,rh BNP干预组细胞增殖指数明显高于PQ组细胞。2、ELISA结果,与正常组比较,PQ组细胞炎症因子IL-6和TNF-α的含量明显增多,而经过rh BNP干预后,PQ所致的炎症因子IL-6和TNF-α的表达明显减小。3、RT-PCR结果,与正常组比较,PQ组TLR4、NF-κB m RNA表达明显增加,而经过rh BNP干预后,TLR4、NF-κB m RNA表达明显减小。结论:（1）PQ大鼠早期血BNP水平可出现升高。（2）rh BNP早期治疗可能改善百草枯中毒大鼠生存率。（3）rh BNP可能通过调控TLR4/NF-κB信号通路来减缓炎症发生从而改善PQ中毒大鼠肺损伤。