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目的本论文基于“引阳入阴”理论,选择代表性的节律性中药半夏、夏枯草、百合、合欢皮等组成“引阳入阴”方,在临床治疗不寐患者有效的基础上,开展相关实验研究验证节律性中药在不寐治疗的有效性,并探索其镇静安眠作用的主要作用机制,为临床治疗失眠提供新的方法和药物。方法1.通过对不寐“引阳入阴”中的阴阳内涵进行界定,对引阳入阴类药物进行分类,并结合对不寐病机,证型与症状特点认识,探析各类引阳入阴药物在不寐证治疗中的应用规律。2.利用4-氯-DL-苯丙氨酸（DL-4-Chlorophenylalanine,PCPA）建立失眠动物模型,以引阳入阴方进行干预,通过小鼠短期自发活动实验的活动距离、戊巴比妥钠睡眠协同实验的入睡潜伏期与睡眠维持时间、强迫游泳与悬尾试验的不动时间等短期活动行为指标,初步验证引阳入阴方的镇静安眠作用及其作用的量效关系。3.在确定量效关系的基础上,以引阳入阴方高剂量干预PCPA大鼠模型,通过对大鼠长期自发活动实验中的24小时活动距离,皮层脑电中睡眠累积量评价药物的总体镇静安眠作用,并通过活跃次数、单位小时的活动趋势、各睡眠期发生次数、平均持续时间、转化次数、各时相持续时间片段分布等进一步分析其睡眠结构,观察药物对睡眠片段化的改善情况,进一步明确引阳入阴方镇静安眠作用的有效性。4.结合PCPA的主要作用靶点5-HT,以超高效液相色谱-质谱联用检测下丘脑组织与血浆中神经递质含量、以免疫印迹分析与RT-PCR检测5-HT1A受体所介导c AMP/PKA/CREB/BDNF信号通路中的基因与蛋白表达水平,探索引阳入阴方镇静安眠的主要作用途径和机制。结果1.阳入于阴是人体睡眠的生理,阳不入阴是不寐的核心病机,引阳入阴是治疗不寐的法则。根据阴阳的本义,符合以水制火,白昼转夜晚,兴奋转抑制,从上导下,舒缓紧张状态等特性的药物,即为引阳入阴类药物。据此将引阳入阴药物划分为五类:利尿导热、交通心肾、缓急敛神、重镇宁心、导阳入阴。根据目前临床上应用中药治疗不寐多为长期慢性的特点,结合“阳不入阴”为不寐发病的病机和体现导阳入阴特点的部分节律性中药的性能、功用特点,组成了临床上治疗不寐病证的基本方:“引阳入阴方”,包括半夏、夏枯草、夜交藤、百合、合欢皮与莲子肉6味药物。2.引阳入阴方具有镇静作用,能够降低小鼠自发活动的活动量,缩短戊巴比妥钠的入睡潜伏期,延长睡眠维持时间,改善PCPA所引起的抑郁状态,其药效随着浓度上升而增强,呈现浓度依赖性,高剂量为镇静作用的有效剂量。同时,其镇静作用不影响第2d的活动行为,可见其无明显残留效应,具有一定的安全性。3.引阳入阴方能够有效抑制大鼠的自发活动,减少大鼠WAKE期的累积量,延长NREM期与REM期的累积量,行为活动抑制作用的起效时间约1h,睡眠脑电改变的起效时间为2-3h,4-5小时达到峰值,维持时间约8-9小时。相较于地西泮,引阳入阴方对睡眠期的作用主要表现为对REM期睡眠的延长作用。进一步结合大鼠自发活动程度,睡眠结构对其觉醒-睡眠的碎片化程度进行分析,结果显示,引阳入阴方能够减少大鼠的活跃程度,降低觉醒-睡眠间的转化频率,延长NREM与REM长时辰的发生次数,改善大鼠睡眠的结构,相比于地西泮其对于睡眠碎片化程度的改善更明显。4.引阳入阴方能够下丘脑组织升高5-HT的表达水平,提高5-HT的利用率,降低NE/5-HT的比值、升高5-HT/DA、5-HT/ACh的比值,改变中枢神经系统的兴奋状态,达到延长睡眠时长的作用,发现5-HT为引阳入阴方镇静安眠作用的可能作用靶点之一。同时,通过WB、PCR方法进一步探索其作用于5-HT的通路机制可能与增加5-HT的合成,促进5-HT1AR表达,抑制5-HT2AR表达,从而激活5-c AMP/PKA/CREB/BDNF信号通路,增加c AMP的表达,上调p Ka、CREB的磷酸化水平,从而促进BDNF在脑组织的累积,而达到改善睡眠的作用有关。结论1.引阳入阴类药物可分为利尿导热、交通心肾（滋阴降火、益精补血）、缓急敛神（补虚敛神、缓急安神）、重镇宁心、导阳入阴五类,并以其中代表性的导阳入阴药物组成“引阳入阴方”,包括半夏、夏枯草、夜交藤、百合、合欢皮与莲子肉6味药物。2.导阳入阴类为不寐的辨病用药,主要针对“阳不入阴”的基本病机;利尿导热类、滋阴降火类、补虚敛神类与益精养血类为辩证用药,前两者针对以入睡困难为特征的火扰心神证,后两者则针对以睡眠维持障碍为特征的心神失养证;重镇宁心类、缓急安神类药物则为不寐的对症治疗。3.引阳入阴方在短期行为学实验中能够有效抑制小鼠自发活动的活动量,缩短戊巴比妥钠的入睡潜伏期,延长睡眠维持时间,改善PCPA所引起的抑郁状态,其镇静安眠作用呈现一定的浓度依赖性。4.引阳入阴方在长期行为学实验中能够通过减少大鼠的活跃程度而抑制大鼠的自发活动距离,通过降低觉醒-睡眠间的转化频率,延长NREM与REM长时辰的发生次数而延长睡眠时间,改善睡眠结构,具有镇静安眠作用。5.引阳入阴方能够升高抑制性神经递质5-HT、5-HIAA的表达,降低兴奋性神经递质NE、DA、ACh的表达,改变中枢神经系统的兴奋状态,其作用机制可能与激活5-HT1AR介导的c AMP/PKA/CREB/BD NF信号通路有关。