论文部分内容阅读
菊花是中国的十大传统名花之一,世界重要盆栽、切花及地被花卉。但低温、干旱条件严重限制了菊花在我国北方城市绿化中大面积应用。植物转录因子不仅在植物的生长发育、形态建成、代谢调控等方面,而且也在抗旱、抗寒、耐盐碱等方面起重要作用。本研究在建立菊花‘小金黄’品种离体再生体系的基础上将拟南芥诱导转录因子CBF1基因转入菊花中,从而为实现菊花品种抗寒、抗旱性状改良奠定基础。利用器官发生途径以‘小金黄’为试验材料,研究生长调节物质对菊花离体不定芽再生的影响。结果表明:菊花叶片在添加1.0 mg/L6-BA的MS培养基中的再生频率为27.1%,显著高于在MS中添加TDZ或KT;在MS+ 1.0 mg/L 6-BA中添加不同浓度生长素,菊花叶片再生频率存在显著差异,其中以MS+ 1.0 mg/L 6-BA+ 0.6 mg/LNAA的叶片不定芽再生频率最高,即为96.9%,高于2,4-D和IBA。菊花‘小金黄’品种最适宜的生根培养基为MS+ NAA 0.4 mg/L。利用根癌农杆菌介导法对菊花‘小金黄’品种的叶片进行遗传转化,研究影响菊花转化的若干因素,建立一套高效的遗传转化体系。结果表明:2天的预培养,OD600值约为0.5的农杆菌菌液添加50 mg/L乙酰丁香酮,侵染时间3 min,2天的共培养,从分化培养基获得的再生不定芽在生根培养基MS + 0.4 mg/L NAA+ 10 mg/L Km+ 100 mg/L Cef上进行延迟筛选,有利于获得较高的转化效率,共获得49个Km抗性株系。通过根癌农杆菌介导的叶盘法将CaMV35S驱动的CBF1基因导入菊花中,对49个Km抗性株系进行PCR检测,有18个株系扩增出的特异条带与阳性质粒扩增出的特异条带一致,阴性对照没有扩增出任何条带,说明CBF1基因已经整合到菊花‘小金黄’品种的基因组中,而抗性株系的PCR阳性率为36.7%。