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鸡蛋高密度脂蛋白（EYHDL）,又叫做卵黄脂磷蛋白,是蛋黄（EY）中第二大类脂蛋白,其具有高磷脂、降血压的特点,是潜在的脂质代谢调节因子。本课题以EYHDL为研究对象,首先从鸡蛋EY分离制备高纯度EYHDL,并对其结构及脂质组成进行表征;利用小鼠营养干预实验,研究EYHDL对小鼠脂质代谢影响;通过对小鼠血清及肝脏脂质组进行系统分析,探究EYHDL对脂质代谢的可能作用;结合体外细胞实验,对细胞脂质及代谢物进行系统分析,找寻EYHDL调控脂质代谢的相关通路;最后开展体外细胞实验对其调控代谢通路进一步验证。主要研究内容和结果如下:（1）建立了一种双水相提取EYHDL的方法,比较了NaCl和（NH4）2SO4两种盐溶液对EYHDL粗品纯度和提取率的影响,结果表明利用NaCl结合PEG的方法可制备纯度较高的EYHDL,在pH 4.5,聚乙二醇（PEG6000）添加量为4%时其纯度（83.0%）和提取率（73.7%）最高。此方法不仅简化了步骤,而且环保高效。利用DEAE-650M阴离子柱实现了EYHDL的高效纯化,随后对纯化后EYHDL的粒径和二级结构分析,发现其粒径在10-20 nm左右,且其蛋白的二级结构以α-螺旋和β-转角为主,表明此方法得到了结构稳定的EYHDL。（2）利用超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）和气相质谱（GC-MS）分析了EYHDL的脂质组分。结果表明,磷脂酰胆碱（PC）为EYHDL中含量最高的脂质组分,与EY相比,其甘油三脂（TG）的含量约为EY的1/4,其含有较高水平的脂酰胆碱（PC）,磷脂酰肌醇（PI）和甘油二酯（DG）（p<0.05）。差异脂质比较结果表明,在ES+模式下,一共检测到22种TG差异脂质,其在EYHDL中的含量均显著低于EY（p<0.01）。在ES-模式中,一共检测到30种差异脂质,包括10种P-胆碱类（9种PC,1种溶血磷脂酰胆碱（LPC））,15种P-乙醇胺类（3种磷脂酰乙醇胺（PE）,2种溶血磷脂酰乙醇胺（LPE））,4种PI和1种鞘磷脂（SM）。相比于EY,EYHDL大多数PC和PE差异脂质显著提高（p<0.01）。此外,GC-MS结果显示,EYHDL较EY含有更高水平的C18:1和C22:6,以及更低水平的C16:0（p<0.05）。（3）建立为期100天的高脂诱导代谢综合征（MetS）小鼠模型,研究EYHDL对血脂相关指标以及与脂代谢有关基因表达的影响。结果显示,相比高脂（HFD）对照组,EYHDL摄入显著抑制了小鼠体重增加和腹部脂肪组织积累,同时降低了血清低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）和TG浓度,以及肝脏TG和总胆固醇（TC）（p<0.05）。此外,EYHDL摄入也增加了小鼠TC排泄量,减轻了脂肪肝病症,改善了葡萄糖和胰岛素耐受性。并对HFD组小鼠肝甾醇调节元件结合蛋-1c（SREBP-1c）,乙酰辅酶A羧化酶1（ACACA）,脂肪酸合成酶（Fasn）,甘油-3-磷酸酰基转移酶（GPAT）和硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD1）等相关基因的上调产生抑制作用。（4）利用GC-MS分析血清、肝脏和粪便中脂肪酸（FA）种类及含量的变化。结果表明,与HFD组相比,EYHDL可显著降低小鼠血清中总脂肪酸（∑FA）和饱和脂肪酸（SFA）如C18:0和C16:0水平,以及肝脏中SFA（C14:0和C12:0）、单不饱和脂肪酸MUFA,C16:1、C16:0和C18:1和多不饱和脂肪酸PUFA,C18:3和C18:2水平（p<0.05）,并促进PUFA如C18:2和C20:3的外排。随后利用UPLC-MS/MS对60天和100天小鼠血清和肝脏脂质组进一步分析。与HFD相比,EYHDL可显著降低血清中PC、FA和TG,并显著提高肝脏中PI和SM（p<0.05）。随后利用正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）找寻差异脂质,在血清中一共检测到10种脂质标志物,其中5种PI,PI（16:0/18:2）,PI（16:0/20:4）,PI（18:0/20:3）,PI（18:0/20:4）和PI（18:1/20:4）显著下调（p<0.01）。肝脏中一共检测到8种下调DG,DG（16:0/18:2）,DG（18:1/18:2）,DG（18:1/20:4）,DG（18:2/18:2）,DG（18:2/20:4）,DG（18:2/22:6）,DG（18:3/18:2）,和DG（22:5/18:2）,2种下调TG(TG（18:1/20:3/22:6）,TG（18:1/22:5/22:6）和3种下调的FA（C20:4,C20:5和C22:6）（p<0.01）,通过代谢通路分析,得出差异脂质涉及到的主要代谢通路为甘油磷脂代谢。（5）建立了体外油酸（OA）诱导HepG2细胞脂肪肝模型,探究EYHDL对于脂肪肝形成的调控机制。结果表明,EYHDL可显著抑制肝细胞内TG脂滴的积累,同时提高细胞内LPE及磷脂酰丝氨酸（PS）含量（p<0.05）。差异脂质结果表明,相比于OA对照组,EYHDL可显著降低TG,并显著提高与脂肪肝形成负相关的LPC、酰基肉碱（CAR）及神经酰胺类（Cer）等物质（p<0.05）,代谢通路分析也证实甘油磷脂代谢是最为相关的代谢路径。此外,利用ESI-QTRAP-MS/MS对下游代谢物分析,在正负离子模式下分别检测到297和230种代谢物。与OA对照组相比,一共鉴定到9种差异代谢物,分别是7种卵磷脂类（LPE 16:0,LPA 16:0,LPC 16:0,LPC18:0,LPC 20:2,LPC 17:0和LPC 18:3）,1种甘油磷酸酯（Glycerol 3-phosphate）和1种脂质（PAF C-16）,其中所有检测到的差异代谢物均在OA+EYHDL组中显著下调（p<0.01）。对代谢通路进行分析,其中甘油磷脂代谢和胆碱代谢是最相关代谢。因此,脂质组和代谢组相关路径分析均表明EYHDL作用机制与甘油磷脂代谢有关,与小鼠实验得到的相关代谢通路相互印证。（6）对甘油磷脂代谢路径进一步验证,长链脂肪酸（LCFA）作为甘油磷脂代谢的原料,其转运吸收异常可造成甘油磷脂代谢紊乱。因此,建立Caco-2和HepG2共培养体系,以评估EYHDL对于6种长链脂肪酸C14:0,C16:0,C16:1,C18:0,C18:1,C18:2转运动态吸收的影响。结果表明,EYHDL可抑制C16:1和C18:2从Caco-2单层膜AP端相BL端的转运,并抑制C16:0、C18:0和C18:1在HepG2细胞中积累,进一步降低TG油滴的积累。对LCFA转运相关蛋白进行Western-blot和RT-qPCR分析,结果表明,EYHDL通过抑制Caco-2脂肪酸转运蛋白2（FATP2）和脂肪酸结合蛋白pm（FABPpm）从而抑制C16:1和C18:2的转运。同时还降低HepG2细胞SREBP-1c及其下游脂肪生成基因ACACA和SCD1的表达,抑制LCFA在肝组织中合成TG。