棉铃虫单核衣壳核型多角体病毒（Helicoverpa armigera single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus，HaSNPV）是一类双链环状DNA病毒，其分子生物学和基因功能研究已取得很大进展。开放阅读框44（open reading frame 44，orf44）是HaSNPV的一个功能未知的结构基因，本文首次对HaSNPV G4株基因组中的orf44基因进行研究报道。orf44基因和Ha44蛋白序列通过生物信息学分析表明：orf44基因长1137bp，预计编码378个氨基酸，预测蛋白质分子大小为42KDa；orf44基因起始密码子上游-80和-88位分别存在晚期启动子信号TAAG和早期启动子信号TATA；基因没有明确的功能结构域；通过PSI-BLAST比对发现，Ha44有多种杆状病毒同源蛋白，这些蛋白存在于groupⅡNPV或颗粒体病毒属（Granulovirus，GV）中，其相应的功能还未知。本试验中，我们用表达载体pGEX-KG及表达宿主大肠杆菌BL21对orf44基因进行谷胱甘肽（GST）融合表达，表达产物约为68KDa，与预期的大小相符。表达蛋白经初步纯化（包涵体纯化和凝胶电泳分离相结合），免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。经ELISA和western-blot检测，获得了特异性较强的抗体，为进一步orf44基因的表达时相分析作准备。我们利用荧光蛋白基因egfp作为报告基因，将orf44和egfp连接在真核表达载体pIZ/V5-His上，形成融合表达产物，转染美洲棉铃虫细胞HzMAl，观察GFP在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下绿色荧光的分布位置，将orf44基因表达产物Ha44定位于细胞核，这表明该蛋白可能是病毒的重要结构基因，参与病毒基因复制与增殖。为研究orf44基因的功能，我们通过同源重组在原核水平将该基因敲除，构建orf44基因缺失型重组病毒。即设计一对70bp，含有orf44基因同源臂的引物，以PCR的方法合成可供同源交换的线性片段P_hsp70-egfp-SV₄₀-Cm^r，借助含有λ噬菌体Red重组系统的质粒pKD46及棉铃虫杆状病毒细菌人工染色体HaBacmid，在大肠杆菌BW25113中进行同源重组。通过PCR及酶切鉴定，我们得到了HaSNPV orf44基因缺失型重组病毒，为进一步在昆虫细胞水平研究此基因的功能奠定了基础。