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二氟甲基鸟氨酸、木黄酮对宫颈永生化上皮细胞、宫颈癌细胞及裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其细胞周期调控机理 目的 观察二氟甲基鸟氨酸（DFMO）、木黄酮（Genistein）等对人永生化宫颈上皮细胞、宫颈癌细胞和裸鼠移植瘤的生长抑制作用，并研究它们的细胞周期调控机理。 方法（1）生长抑制分析：永生化宫颈上皮细胞系（H8细胞）和两个宫颈癌细胞系（CaSki和HeLa细胞）单层培养，检测DFMO或Genistein的生长抑制作用。应用磺酰罗丹明B（SRB）法，绘制细胞生长曲线，并获得药物处理5天时抑制50％细胞生长所需药物浓度(IC50)。（2）细胞周期分析：应用Coulter EPICS XL型流式细胞仪分析细胞DNA含量。（3）免疫荧光分析：第一抗体为细胞周期蛋白D1（cyelin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）、p21蛋白的单克隆抗体，第二抗体采用荧光素标记，应用流式细胞仪检测荧光强度。（4）逆转录PCR（RT-PCR）：应用RT-PCR半定量检测细胞cyclin D1、cyclin B1、CDK4、CDK1、p21的mRNA表达。（5）恶性转化：佛波酯（TPA）转化永生化宫颈上皮细胞（H8细胞），40天。（6）恶性转化的阻断：DFMO、Genistein加入含TPA的培养基中，培养永生化宫颈上皮细胞（H8细胞），40天。（7）裸鼠移植瘤：裸鼠皮下接种TPA恶性转化H8细胞（DFMO、Genistein处理和未处理的）、宫颈癌CaSki细胞。（8）药物体内作用：给予荷瘤裸鼠DFMO、Genistein，灌胃，每日一次，14天。等量生理盐水作空白对照。（9）移植瘤瘤重：每3日测量瘤体长径和宽径，计算瘤体积，并换算为瘤重，观