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本研究以野生鸟类血浆为实验材料,利用高效液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)建立了测定野生鸟类血浆内皮质酮和睾酮的定量分析方法。与传统的酶联免疫法和放射免疫法相比具有操作简便、分析速度快、特异性强和准确度高等优势,可作为常规检测野生鸟类(野生动物)血浆内皮质酮和睾酮的方法。主要研究结果如下：1、建立了高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定野生鸟类血浆内皮质酮的方法。血浆经乙醚萃取后,以乙腈-0.1%甲酸缓冲盐溶液(含0.01mol/L甲酸铵)为流动相,采用梯度洗脱方式,用Agilent Eclipse Plus-C18柱分离,通过三重四级杆串联质谱多反应监测方式进行检测。方法线性范围为1-100ng/ml,检出限为1.0ng/ml,提取回收率为85.1%-87.4%,日内、日间精密度相对标准偏差(RSD)分别小于5.94%和9.51%。结果表明该方法血浆前处理简单,分析快速,不需要衍生化,结果准确可靠,可作为一种常规检测方法分析野生鸟类血浆内皮质酮浓度。2、建立了羟胺衍生-高效液相色谱-串联质谱法测定野生鸟类血浆内睾酮的方法。血浆经乙腈沉淀蛋白,正己烷脱脂后用盐酸羟胺进行衍生,衍生后经叔丁基甲醚萃取,以乙腈-0.1%甲酸缓冲盐溶液(含0.01mol/L甲酸铵)为流动相,采用梯度洗脱方式,用Agilent Eclipse Plus-C18柱分离,通过三重四级杆串联质谱多反应监测方式进行检测。方法线性范围0.1-100ng/ml,检出限为0.1ng/ml,提取回收率为75.8%-79.3%,日内、日间精密度相对标准偏差分别小于6.97%和9.81%。结果表明方法线性范围宽,灵敏度和专属性高,检出限低,样品量少,可以作为一种常规检测方法分析野生鸟类血浆内痕量睾酮浓度。3、建立了高效液相色谱-串联质谱法同时测定野生鸟类血浆中皮质酮和睾酮的方法。血浆经乙醚/二氯甲烷(V：V/6：4)萃取后,以乙腈-0.1%甲酸缓冲盐溶液(含0.01mol/L甲酸钱)为流动相,采用梯度洗脱方式,用Agilent Eclipse Plus-C18柱分离,通过三重四级杆串联质谱多反应监测方式进行检测。皮质酮和睾酮测定方法的线性范围分别为1-100ng/ml和0.5-100ng/ml,检出限分别为1ng/ml和0.5ng/ml。方法提取回收率分别为81.7%-82.9%和84.2%-87.2%,日内、日间精密度相对标准偏差分别小于7.82%和9.60%。结果表明方法样品处理简便,分离度好,灵敏度和专属性高,定量准确可靠。