目的：通过对第三方骨髓间充质干细胞（Bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs）注射同种异体皮片移植小鼠受体的研究,验证BMSCs具有延长受体小鼠皮片存活的作用,并初步研究其MSCs诱导同种异体免疫耐受的作用机制。方法：1BMSCs的分离、培养和鉴定：无菌条件下取SD大鼠股骨,制成骨髓单细胞悬液。采用全骨髓培养法,接种于含有10%FBS的DMEM的培养瓶中培养,间隔3d除去非贴壁细胞,待细胞铺满至瓶底达90%时传代,取第3代以后的细胞,调整浓度为2×106/ml备用。流式细胞仪鉴定SD大鼠MSCs表面抗原CD29、CD34、CD45和CD90。2动物模型的建立：40只雌性C57BL/6小鼠作为供体,麻醉后于其躯干部以钳夹法制成一约1cm2的圆形皮片；40只雄性BALB/C小鼠作为受体,剪去全层皮肤一块,形成约1 cm2的圆形创面,建立稳定的同种异体皮肤移植模型。3细胞,药物输注与实验分组：将40只BALB/C小鼠随机分为4组：①空白对照组：只进行皮肤移植,未给予其他治疗；②环磷酰胺组（CP组）：大剂量环磷酰胺（Cyclophosphamide, CP）腹腔注射,200_mg/kg,连用2_d（q.d.）；③单纯给予SD-BMSCs移植组（SD-BMSCs组）：移植当天自受体小鼠尾静脉输注2×106个SD-BMSCs;④细胞药物联合运用组（CP+ SD-BMSCs组）：大剂量环磷酰胺组（Cyclophosphamide, CP）腹腔注射,200mg/kg,连用2d（q.d.）,并于移植当天自受体小鼠尾静脉输注2×106个SD-BMSCs。4移植皮片的大体观察与HE染色：术后第7天观察受体小鼠移植的皮片,并记录存活时间。皮片90%结痂为坏死,若皮片完全变黑、发硬、脱落视为排斥,进行病理分级；并取每组受体小鼠移植皮片进行HE染色观察。5受体小鼠脾脏调节性T细胞（CD4+、D25+、Foxp3+、Treg细胞）的检测：取移植术后第7天受体小鼠脾制备单细胞悬液,用CD4、CD25、Foxp3荧光标记抗体检测移植后Treg细胞的含量。6受体小鼠外周血细胞因子（TGF-p、IL-10、IFN-γ）的检测：取移植术后第7天受体小鼠外周血进行TGF-βIL-10、IFN-γ细胞因子ELISA检测。7不同来源异基因MSCs刺激T淋巴细胞增殖的情况检测：异基因T淋巴细胞（来源于C57小鼠或SD大鼠）与经60Co照射的不用来源MSCs共培养后,MTT法测定异基因T淋巴细胞增殖的情况。结果：1SD-BMSCs的培养观察与鉴定：全贴壁原代培养的BMSCs₄8 h后可见有细胞贴壁生长,部分形态变为梭样,之后细胞迅速增长,至7～11d时细胞已增殖至90%融合,呈漩涡状生长。传代细胞24 h贴壁,5～7_d传一代,可稳定传代至少20次；流式细胞仪鉴定经培养的MSCs的结果为：间充质干细胞表面标志CD29、CD44阳性率分别为99.7%和96.7%；造血系干细胞表面标志CD34,CD45阳性率分别为1.6%和1.3%。2移植皮片的存活时间与HE染色结果：CP+ SD-MSCs组皮肤移植物存活时间为（15.7±1.4）d,空白对照组为（6.1±1.1）d,CP组为（12.3±1.5）d,SD-BMSCs组为（12.6±1.8）d,CP+ SD-BMSCs组皮肤移植物存活时间明显比后3组延长（P<0.05）；对照组表现为表皮与真皮层完全坏死,细胞数量明显增加,炎症反应明显。药物组和细胞组可见真皮细胞减少,并呈现广泛纤维化。药物和细胞组可见部分表皮缺失,真皮层正常,并可见毛囊结构。3受体小鼠脾脏调节性T细胞（CD4+、CD25+、Foxp3+、Treg细胞）的检测结果：流式细胞仪检测Treg含量SD-BMSCs组和CP+ SD-BMSCs组明显高于空白对照组和CP组（P<0.05）.4受体小鼠外周血细胞因子（TGF-β、IL-10、IFN-γ）的检测结果ELISA检测受体外周血MSCs组和CP组TGF-β和IL-10明显高于空白对照组,SD-BMSCs和CP组IFN-γ则明显低于空白对照组（P<0.05）.5不同来源MSCs刺激异基因T淋巴细胞增殖的情况检测：共培养结果显示：来源于C57小鼠和SD大鼠的MSCs可以明显抑制T淋巴细胞的增殖反应（P<0.05）,而上述两组组间比较差异则无统计学意义（P>0.05）结论：1第三方MSCs能够延长同种异体皮片移植物的存活时间.2第三方MSCs诱导同种异体移植免疫耐受作用可能与诱导受体Treg细胞增殖有关.3第三方MSCs诱导同种异体移植免疫耐受作用可能与促进免疫耐受因子的表达,抑制免疫排斥因子的表达有关.4不同来源的MSCs在抑制异基因T淋巴细胞的作用上没有明显差别